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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
ENDOCRINOLOGIA V - REGULACION Y FISIOLOGIA ENDOCRINA Coordinadores: MA Rivarola, C Paz 155. Regulación de la función adrenocortical (AC) por la
leptina (LEP) en ratones ayunados. Andrés Giovambattista, A Chisari,
E Spinedi. El objetivo del estudio fue el determinar si existe un rol modulatorio de la LEP sobre la secreción, basal (VEH) y post insulina (INS), de corticosterona (B; en mg/dl). Se estudiaron tres grupos de ratones BALB/c, macho, ayunados durante 24 hs e inyectados (ip) con: I) VEH y sacrificados a los 45 min (VEH-t0); II) VEH, reinsertos en dieta normal, y sacrificados 45 min después (VEH-t45); y III) INS (0,3 UI/ratón), reinsertos en dieta normal, y sacrificados a los 45 min posteriores (INS-t45). Los resultados plasmáticos indican que los animales VEH-t45: a) incrementaron significativamente (p<0,05) la glucosa (en g/l) de 0,95+0,05 (VEH-t0) a 1,42+0,03; b) disminuyeron en forma significativa (p<0,05) la B de 7,7+03 (VEH-t0) a 4.9+0,9; y c) aumentaron significativa-mente (p<0,05) la LEP (en ng/ml) de 2,19+0,36 (VEH-t0) a 4,02+0,39. Los ratones del grupo INS-t45 mostraron: 1) una significativa hipoglucemia (0,68+0,04; p<0,05 vs. VEH-t0 y VEH-t45); 2) niveles de B (4,61+0,80) significativamente (p<0,05) menores que los VEH-t0 pero no que los VEH-t45; y 3) una concentración de LEP (4,06+0,93) semejante a la del VEH-t45 y significativa-mente (P<0,05) mayor que la del VEH-t0. Este estudio sugiere un posible rol inhibitorio de la LEP sobre la actividad AC, independiente de la glucemia.
156. Inhibición de la ACAT (Acil CoA Colesterol Acil
Trans-ferasa) y esteroidogénesis en células de Leydig MA-10. OP
Pignataro El colesterol (Col) es un precursor indispensable para la síntesis de esteroides y puede provenir de las lipoproteínas plasmáticas, de la síntesis de novo o de depósitos de ésteres de col (CE). Se estudió el efecto de la inhibición de la ACAT, enzima responsable de la esteri ficación del col libre, sobre la esteroidogénesis en células MA-10. Se utilizó el inhibidor específico 58-035 (Ai) (Sandoz Argentina) en una concentración de 2 mg/ml. Las células se incubaron con distintos factores en ausencia o presencia de Ai y se determinó la incorpora ción de 3H-ácido oleico a CE, la concentración celular de CE y la progesterona (Pg) producida. Resultados: Curvas dosis-respuesta para la producción de Pg en presencia de hCG o db-AMPc, mostraron una disminución de la ED50 en presencia de Ai, con respuestas máximas similares. Una dosis máxima de EGF, que provoca un aumento de Pg, mostró un efecto sinérgico en presencia de Ai (C: 2.5 ± 0.1, EGF: 12.1 ± 0.3; Ai: 5.4 ± 0.4; EGF + Ai: 88.0 ± 3.0 ng Pg/106 cel). Conclusiones: a) En las células de Leydig MA-10, la inhibición de la ACAT aumenta la disponibilidad de col libre e incrementa la síntesis de esteroides. b) El EGF, de la misma manera que la gonadotrofina, regularía el paso limitante de la esteroidogénesis, favoreciendo la entrada del col citoplasmático a la mitocondria.
157. Envejecimiento y respuesta gonadotrófica al
N-metil-D-aspartato (NMDA) y a la luteoliberina (LHRH) en la rata
hembra P Arias, Alejandra Valerani, JA Moguilevsky A fin de evaluar la participación de mecanismos hipotalámicos e hipofisarios en los cambios de la función reproductora asociados al envejecimiento, estudiamos, en ratas Wistar hembra de 6 (JOV), 12 (MED) y 18 meses (VIE) de edad (ovariectomizadas + 100 mg/kg de benzoato de estradiol) la liberación de LH (medida por RIA): a) in vivo, tras 15, 30 y 45 mg/kg de NMDA i.v.; b) in vitro, en hemihipófisis incubadas con LHRH (1, 10 y 100 nM). Los niveles séricos basales de LH fueron significativamente mayores (p< 0.05, ANOVA) en ratas JOV vs VIE. En ratas JOV, el NMDA (30 y 45 mg/kg) incrementó significativamente (p< 0.05) la LH circulante; este efecto se observó en ratas MED únicamente tras 45 mg/kg. Ninguna de las dosis administradas provocó una elevación significativa de este parámetro en ratas VIE. In vitro, no se observaron diferencias significativas entre los grupos JOV y MED en cuanto a la liberación de LH estimulada por LHRH. En el grupo VIE se demostró una respuesta reducida (p< 0.05 vs JOV) a LHRH 1 nM. Concluimos que el acontecimiento del ciclo estral, acompañado de anovulación, que están presentes en ratas a partir de los 12-14 meses de edad, se debería a un mecanismo hipo-talámico (insuficiente respuesta a glutamato); las ratas de 18 meses de edad presentan una respuesta hipotalámica aún más deteriorada, y una afectación del gonadotropo (quizás secundaria al déficit crónico de LHRH, producto de las alteraciones hipotalámicas).
158. Dilucidando los mecanismos inhibitorios del alcohol sobre
la secreción de LHRH A Lomniczi, C Mastronardi, A Faletti, aA De
Laurentiis, aA Seilicovich, bSM McCann, V Rettori En estudios previos demostramos que el alcohol (EtOH) inhibe la secreción estimulada de la hormona liberadora de gonadotro-finas (LHRH), de hipotálamos medios basales (HMB´s) de rata macho adulta incubados in vitro. Se estudió la participación de los sistemas opioide y GABAérgico en esta inhibición. Los experimentos se realizaron con HMB incubados in vitro en Krebs-Ringer-Bicarbonato a 37°C con carbógeno. Se midió la liberación de LHRH y b-Endorfina (b-End) por RIA, y GABA por ensayo de radio receptor. EtOH (100mM) aumentó la liberación de b-End (C: 2±0,098 ng/HMB; EtOH: 3,5±0,32; n=6-8;p<0,001) y GABA (C: 0,286±0,027 nmoles/mg prot; EtOH: 0,484±0,057; n=7; p<0,05). b-End aumentó la secreción de GABA (0,461±0,09) (n=6;p<0,05) y GABA no afectó la de b-End. La secreción de LHRH (C: 5,08±0,28 pg/HMB; n=13) estimulada por nitropru- siato de sodio (600mM)(8,6±0,77; n=9; p<0,001) fue inhibida tanto por b-End (10-8M)(6±0,42; n=10; p<0,05) como por EtOH (5,05±0,62; n=9; p<0,001), esta inhibición no se revirtió con naltrexona ni bicuculina. Estos resultados indican que aunque el EtOH estimula GABA y b-End, inhibidores de LHRH, a su vez inhibe directamente la secreción de LHRH.
159. Rol de la FSH y la testosterona en el desarrollo
espermatogénico en humanos. Ana Keselman, Stella Campo, C. Bergadá,
H. Chemes La Hiperplasia Suprarrenal Congénita Virilizante (HSCV) es una enfermedad familiar con seudo-pubertad precoz en varones. Un paciente de 23 años consultó por esterilidad con azoospermia, talla baja, y testículos pequeños. Había comenzado su pubertad a los 5 años, y por tener un hermano de 5 años con HSCV se realizaron estudios que confirmaron este diagnóstico. La biopsia testicular mostró inmadurez espermatogénica. Se inició tratamiento corticosteroide, y se siguieron las variables a los 0, 2, 4, 5, 7 y 9 meses post tratamiento: 17OH Progesterona (17OHP4 ng/ml) 170, 0.8, 0.7, 6, 1.2, 3.1; Testosterona (T) plasmática (ng/dl) 1830, 75, 105, 178, 148, 220; Volumen testicular (VT, ml, der/izq) 5/6, 6/8, 10/12, 10/12, 12/12; espermatozoides (106 ml) 0, 0, <0.1, <0.5, 0.9, 1.4), FSH (basal mU/ml) 1.0, 4.8, ND, ND, 5.0, 5.4. Luego de la caída inicial de la 17OHP4 y la T de origen adrenal, hubo un sostenido aumento de la T de origen testicular y la FSH, con desarrollo testicular y producción de espermatozoides. La inhibina B aumentó de 180 pg/ml (infantil) a 440 pg/ml (puberal). El incremento de la inhibina B, el VT y los espermatozoides coincidió con el progresivo aumento de la FSH y T, sugiriendo que la combinación FSH-T es necesaria para la maduración Sertoliana y desarrollo espermatogénico en humanos.
160. Una fosfoproteína regulada por hormonas intermediaria en
la liberación de acido araquidónico es 100% homóloga a una acil-CoA
tioesterasa. CV Finkielstein, PM Maloberti, P.G Mele, EJ Podestá Previamente demostramos la secuenciación parcial de una
fosfoproteina ACTH dependiente (p43) que regula la síntesis de
esteroides a través de la liberación de ácido araquidónico (AA).
En el presente trabajo mostramos que la misma resultó ser 92% y 100%
homóloga a dos acil-CoA tioesterasas (citosólica y mitocondrial
respectivamente) de hígado de rata, ambas inducibles por
proliferadores de peroxisomas y recientemente ingresadas al GeneBank.
La proteína muestra un motivo de serina lipasa y un motivo G-X-H
cercano al carboxilo terminal que es necesario para su actividad
enzimática. En la región amino terminal se encuentra una cisteína
que podría estar involucrada en el sitio activo de la tioesterasa.
Anticuerpos dirigidos contra el motivo serina lipasa (ASL) y la
región amino terminal (ARA) inhiben la actividad esteroidogénica
(113,0 ± 10,0 vs 51,1* ± 6,3 vs 25,0** ± 3,2; media ± DS, % del
control para suero normal, ASL y ARA respectivamente; n=4, *p<0.01;
**p<0.001). Dado el papel obligatorio de esta proteína en la
síntesis de esteroides a través de la liberación de AA proponemos
el nombre de ARTISt (Arachidonic acid Related Thioesterase Involved in
Steroidogenesis). Estos resultados postulan una nueva vía de
regulación de la liberación de AA en el mecanismo de transducción
de señales a través de la activación de receptores de membrana. 161. Activación de una tioesterasa específica para ácidos
grasos de cadena larga en corazones perfundidos con agonistas
adrenérgicos. Isabel Neuman, Constanza Lisdero, P Mele, Paula
Maloberti, JJ Poderoso, EJ Podestá Previamente hemos comprobado que el citosol de corazón perfundido
con el agonista beta adrenérgico isoproterenol (ISOP) (10 -7 M) es
capaz de estimular la síntesis mitocondrial de esteroides adrenales.
En este trabajo se investigó la presencia de una proteína liberadora
de ácido araquidónico (AA) en citosol cardíaco. El efecto del
citosol perfundido con ISOP es dosis dependiente e inhibible por
propranolol (ISOP: 10-9, 10-8,10-7,10-6 M: 90±15,
930±87,1280±124,1650±145 pg de progesterona/incubación
respectivamente; n=4). Por otra parte no es inhibido por inhibidores
de la proteínquinasa AMPc- dependiente. Anticuerpos antipéptidos
dirigidos contra los sitios activos (entre ellos un motivo de serina
lipasa) de la proteína ARTISt (arachidonic acid related thioesterase
involved in steroidogenesis) descripta por nuestro laboratorio
bloquean la actividad del citosol. Más aún, inhibidores de la
liberación y metabolización de AA bloquean la actividad en citosol.
Esta actividad citosólica también es observada con el agonista alfa
adrenérgico fenilefrina . Los resultados sugieren la presencia de
ARTISt en corazón, regulable por agonistas alfa y beta adrenérgicos.
Se muestran por primera vez evidencias de un mecanismo alternativo
para la liberación de ácido araquidónico en tejido cardíaco. |
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