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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
GASTROENTEROLOGIA II - ISQUEMIA Y PROTECCION HEPATICA Coordinadores: MC Carrillo, A Lemberg 137. Las modificaciones de los niveles de óxido nítrico y
lipoperoxidación, influyen en el proceso de regeneración hepática?
Cristina Carnovale, M Cristina Carrillo, Luján Álvarez, C Favre, J
Monti Objetivo: Analizamos la posible influencia de lipoperoxidación (LPO) y óxido nítrico (NO) en el proceso de regeneración hepática. Métodos: Ratas Wistar machos adultas fueron divididas en 3 grupos: control(C) Sham(S) y hepatectomizado (HP 65%). 4 animales de cada grupo (n=12) recibieron aminoguanidina (AMG) (inhibidor de NO sintasa, NOS2) 100 mg/Kg PC i.p. cada 24h durante 3 días, otros 4 una dosis de lipopolisacárido (LPS) (activador de NOS2) 2 mg/Kg PC i.p. Las ratas fueron sacrificadas a las: 1, 3 y 5 hs luego de la cirugía S y hepatectomía. Resultados: El máximo aumento se observó a las 5 h después de la hepatectomía en LPO determinada como nmol de malondialdehído/100mg proteína microsomal (C: 110±10; S-5h: 114±5; HP-5h: 154±15* ) y determinada como la absorbancia de conjugados dienos microsomales a 233nm(C: 860±20; S-5h: 877±15; HP-5h: 979±22*) y en NO (nmol de nitrato/mg de proteína citosólica) (C: 8.90±1.2; S-5h: 8.5±1.5 ; HP-5h: 15.6±2.0*) (*p<0.05). El pretratramiento con AMG disminuyó estos aumentos, mientras que el LPS produjo en HP-5h un aumento del 31% en LPO y del 83% en NO respecto del C. La incorporación de [3H]-timidina al DNA (dpm/mg DNA), un índice de regeneración, en las ratas pretratadas con AMG, mostró una disminución del 30% en el pico observado normalmente a las 24h después de una HP (HP-24h-C: 41250±3100; HP-24h-AMG: 28770± 2785; *p<0.05), no existiendo diferencias significativas en las ratas HP tratadas con LPS. Conclusión: La disminución en la producción de NO y por ende de LPO durante las primeras horas de la regeneración hepática producen una disminución en el proceso de regeneración.
138. Efecto inhibidor del Interferon alfa-2b (IFNa-2b) sobre la
regeneración hepática: ornitina decarboxilasa (ODC) y síntesis
proteica. C Favre, J Monti, Cristina Carnovale, M Cristina Carrillo. En este estudio analizamos la acción del IFNa-2b sobre la síntesis de proteínas en el hígado de ratas parcialmente hepatec-tomizadas y el nivel de la proteína ODC que participa en la síntesis de putrescina, poliamina esencial en el proceso regenerativo. Métodos: Ratas machos Wistar se dividieron en dos grupos sham (SH) y parcialmente hepatectomizados (HP); la mitad de cada grupo fue tratada con vehículo o IFNa-2b (2.5 105 U, i.p., 16 h antes y en el momento de la operación). A las 24 h de la cirugía se realizaron las siguientes determinaciones: síntesis hepática de DNA y de proteínas, concentración de putrescina hepática y detección de la proteína ODC en lisado total de hepatocitos. Resultados: IFNa-2b no modificó la síntesis de DNA durante la regeneración hepática, pero sí disminuyó significativamente la síntesis proteica, siendo la velocidad fraccional de síntesis 12.1±1.7 y 7.0±2.0 %/min en los grupos HP tratados con vehículo o IFN respectivamente. Los niveles de putrescina en estos grupos fueron: 105±3 y 63±8 nmol/g hígado respectivamente (p<0.01). La proteína ODC se halló significativamente disminuída en el grupo regenerante tratado con IFNa-2b respecto al grupo HP vehículo (densidades de banda: 192±24 y 401±17 unidades arbitrarias respectivamente. Conclusiones: El tratamiento con IFNa-2b disminuyó la síntesis proteica aún cuando no se observaron efectos sobre la síntesis de DNA. La disminución de ODC podría ser en parte responsable de estos resultados, al producirse niveles de putrescina que no logran mantener el pico de síntesis de proteínas tras la hepatectomía. Estos hallazgos pueden ser importantes en la terapéutica ya que IFNa-2b es usado durante estados regenerativos, como ocurre luego del transplante hepático en pacientes HCV.
139. Eventos metabólicos y post-metabólicos en la protección
por silimarina (S) de la colestasis inducida por etinilestradiol (EE)
en la rata. MG Roma, EJ Sánchez Pozzi, CO Favre, JM Pellegrino, FA
Crocenzi, Viviana A Catania, MG Luquita, AD Mottino, R Coleman. Se investigó si la S protege de la colestasis por EE (5 mg/Kg/día, s.c., 5 días) modificando su metabolización (oxidación y/o glucuronización) o, alternativamente, contrarestando los efectos deletéreos producidos por su metabolito glucuronizado, altamente colestásico. S (100 mg/Kg/día, i.p., 5 días) disminuyó en lugar de aumentar CYP3A4, la isoforma del citocromo P-450 responsable de la oxidación degradativa de EE, y pareció tener un efecto inhibitorio aditivo sobre la disminución inducida por EE (Control: 3.0±0.4; EE: 1.6±0.2*, S: 0.8±0.1*#, EE+S: 0.5±0.2*# pmol/min(mg prot.)-1; *p<0.05 vs con-trol, #p<0.05 vs EE). Por el contrario, la actividad EE UDP-glucuronosiltransferasa no registró cambios. El pretrata-miento de duplas aisladas de hepatocitos de rata con el componente activo de S, silibinina (Sb, 2.5 µM, 30 min), previno la inhibición inducida por estradiol 17b-glucurónido (E17b-G, 20 µM, 15 min) en el % de duplas que transportaron a la vacuola canalicular el análogo de sal biliar fluorescente colil-lisil-fluoresceína (Control: 73.3±1.9%, E17b-G: 42.9± 2.2%*; E17b-G+Sb: 74.6±2.5%*; p<0.05 vs control). Se concluye que S ejercería en parte sus efectos hepatoprotectores, a un nivel post-metabólico, previniendo las alteraciones ocasionadas por el metabolito glucuronizado de EE sobre el transporte de sales biliares canalicular.
140. Secretina estimula la secreción biliar aumentando la
inserción de canales de agua aquaporina-1 (AQP1) en membrana apical
del colangiocito. RA Marinelli, Pamela Tietz#, L Pham#, P Agre*, NF
LaRusso#. En colangiocitos aisaldos, la secretina aumenta la permeabilidad de membrana al agua induciendo la inserción exocítica de AQP1 (Marinelli et al. JBC 272:12984. ’97). En este trabajo se evaluó in vivo el rol de dicho proceso en la secreción biliar ductular estimulada por secretina. Se infundió i.v. secretina (10-7 M, 20 min) a ratas con proliferación ductular y seguidamente: (a) se aislaron los colangiocitos y se prepararon membranas plasmáticas, apical y basolateral. Se determinó AQP1 por inmunobloting y densito-metría y la actividad del marcador apical gGT; (b) se realizó inmunohistoquímica para AQP1 en hígado. En otros experimentos, se inyectó inhibidor de microtúbulos colchicina (0.5 µmol/100 g rata) 2 hs antes de la secretina. La secretina aumentó el flujo biliar (66.2±9.7 vs 119.3±8.7 µl/min/Kg p<0.01, n:3) y APQ1 en membrana apical (1.5±0.1 vs 3.4±0.4 U.A. p<0.05, n:3) sin afectar la actividad gGT apical (20.1±4.1 vs 21.9±2.0 U/mg proteína) o la APQ1 basolaterl (0.7±0.2 vs 1.0±0.2 U.A.). Colchicina bloqueó los efectos de la secretina. La inmunohistoquímica confirmó la inserción apical de APQ1 inducida por secretina. Conclusión: la secretina induce in vivo la inserción dependiente de mictotúbulos de APQ1 en membrana apical (polo secretorio del colangiocito), un proceso que cumpliría un rol central de bilis ductular.
141. Prevención y reversión de la injuria mediada por Ca2+ por
el inhibidor de proteína-kinasa C (PKC) H-7 en duplas aisladas de
hepatocitos de rata (DAHR). MG Roma, J Ahmed-Chaudhury, R Coleman Activación de PKC produce alteraciones morfo-funcionales en DAHR similares a aquellas inducidas por Ca2+. Dado que PKC es activada por Ca2+, investigamos si el inhibidor de PKC H-7 es capaz de contrarrestar estas últimas. Los agentes elevadores de Ca2+ A23187 (0.16 µM) y ATP (50 µM) aumentaron el % de DAHR exhibiendo vesículas de membrana y redujeron el % de DAHR que acumularon en su vacuola canalicular la sal biliar fluorescente colil-lisil-fluoresceína (CLF, 2µM), así como el % de DAHR que retuvieron CLF una vez excretada. H-7 (100 µM, 5 min) previno esos efectos. (Vesiculización: C: 15±4, A23187: 65±5%*, A23187+H-7: 13±2, ATP: 77±7%*, ATP+H-7: 22±3%; Acumulación: C: 69±3%, A23187: 37±3%*, A23187+H-7: 71±3%*, ATP: 35±2%, ATP+H-7: 70±4%; Retención: C: 69±1%, A23187: 40±2%*, A23187+H-7: 80±6%, ATP: 82±8%; *p<0.001 vs C). La elevación de Ca2+ produjo una redistribución de actina (visualizada con faloidina-FITC) de la zona pericanalicular al cuerpo celular. H-7 no solo previno, sino que también revirtió parcialmente en 1 h la formación de vesículas y la reducción de la acumulación de CLF inducida por A23187 (Vesiculización: de 88±6% a 49±4*%; Acumulación: de 16±5% a 49±3*%; p<0.005). Se concluye que H-7 previene y revierte la injuria hepatocelular inducida por Ca2+, posiblemente bloqueando la activación de PKC mediada por este ión.
142. Evaluación de la funcionalidad en cultivos primarios de
hepatocitos obtenidos en aislamientos de baja viabilidad inicial.
Mariana Barbich , Alicia Lorenti, Patricia Sorroche, E Mullen, P
Argibay Tradicionalmente se requiere un gran número de hepatocitos viables
y funcionales para sostener las funciones del hígado. Por ello los
aislamientos marginales (baja viabilidad) son generalmente
descartados. El objetivo de este trabajo fue cultivar in vitro durante
un periodo de un mes células aisladas de hígados de ratas cuyas
viabilidades iniciales no superaban el 55% y determinar su
funcionalidad. Los hepatocitos fueron aislados con el método de doble
perfusión y cultivados utilizando medio F10 suplementado con SFB(10
%), EGF, transferrina, BPE, insulina e hidrocortisona. Desde el inicio
se observó producción de albúmina con un valor máximo de1.28±0.07
µg/ml/día vs 0 del control, asimismo se determinó producción de
urea basal con un pico de 10.38±2.24 mg %/día vs 2.33±0.67 del
control. La actividad del citocromo P450 se determinó por MEGX con un
pico de 737±25 ng/ml vs 145±18.67del control. La histología mostró
células viables a las 4 semanas. Estos resultados indican que, aunque
el porcentaje de células viables no sea alto, estas son capaces de
mantener funciones de síntesis y detoxificación. |
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