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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
HEMATOLOGIA I -
FISIOPATOLOGIA PLAQUETARIA 17. Efecto de la trombopoyetina (TPO) y del factor estimulador
de colonias granulocíticas (G-CSF) sobre plaquetas. R. Pozner, M.
Schattner, G. Collado, A. Gorostizaga, M. A. Lazzari TPO y G-CSF podrían ser utilizados en forma simultánea en pacientes con aplasia medular. Evaluamos el efecto de ambas citoquinas en plaquetas. La adición de TPO o G-CSF a un plasma rico en plaquetas no produjo agregación ni liberación de ATP. La agregación primaria por ADP se transformó en una respuesta irreversible (n=5) con liberación de ATP (2±0.8 mM, n=3) si las plaquetas fueron preincubadas con TPO. La preincubación con G-CSF no modificó los valores de agregación y de ATP inducidos por ADP o por ADP+TPO. La expresión basal de GPIb (mediana de la intensidad de fluorescencia) (67±3, n=7) medida por citometría de flujo, disminuyó por estimulación con TPO (54±3), G-CSF (58±3) o TPO+G-CSF (48±2). La expresión de GPIIb no se modificó por tratamiento similar. La preincubación de plaquetas con TPO aumentó el porcentaje de células positivas para P-selectina inducidas por una concentración subumbral de trombina (15±2 y 9±1 respectivamente, n=5). El G-CSF (7±2) no tuvo efecto y ambas citoquinas reproducen la acción del TPO (14±2). El efecto de activación celular obtenido por TPO sobre plaquetas no se modifica por la presencia de simultánea de G-CSF.
18. Niveles de expresión y proteicos de receptor soluble de
Interleuquina 6 en pacientes con trombocitemia esencial. Rosana F.
Marta, C.J. Pirola, Laura I. Kornblithtt, Paola R. Lev, Felisa C.
Molinas La trombocitemia esencial (TE) es una enfermedad mielopro-liferativa clonal en la que demostramos que el 51% de los pacientes sin tratamiento tiene aumento de receptor soluble de Interleuquina 6 (IL-6sR) en plasma. El objeto de este estudio fue medir el IL-6sR intraplaquetario (6 pacientes sin tratamiento y 7 normales) y los niveles plasmáticos antes y durante el tratamiento con anagrelide en 16 pacientes por técnica de ELISA. Se evaluó también la expresión del mRNA específico para el IL-6sR y el receptor anclado (IL-6R) relativo a la expresión de b2microglobu-lina (b2M) en células mononu-cleares totales por RT-PCR (8 pacientes sin tratar y 4 normales). Los niveles intraplaquetarios de los pacientes 493 pg/109 plaq (235-1056) (mediana y rango) y del grupo normal, 758 pg/109 plaq (619-1069) no difirieron, ni tampoco los niveles de IL-6sR plasmático pre y bajo tratamiento: 43.8 ng/ml (30-53) y 42.1 ng/ml (25.8-50.9). Se encontró una tendencia al aumento en los niveles de expresión de IL-6sR relativo a b2M (pacientes 0.42, normales 0.29, p=0.054). En síntesis se observa una tendencia al aumento de la expresión del IL-6sR en la TE y el anagrelide no la modifica.
19. Niveles plasmáticos e intraplaquetarios de factores de
crecimiento en Trombocitemia esencial. Paola Lev, Rosana Marta, Silvia
Barredo, Felisa Molinas. La Trombocitemia esencial (TE) es una enfermedad mielopro-liferativa clonal. Estudiamos factores de crecimiento involu-crados en la proliferación megacariocítica en 9 pacientes con diagnóstico de TE según criterios ya establecidos y 9 controles normales. Se utilizó plasma pobre citratado y plaquetas lavadas con buffer Hanks conservadas a -80°C. Se dosó el factor de crecimiento de transformación beta (TGF b), el factor de crecimiento fibroblastico básico (bFGF) y el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), por método de ELISA (R&D). Los valores intraplaquetarios obtenidos en pacientes y normales fueron: bFGF: 1.5 ng/ml (0.5-2.4) (mediana y rango) y 0.34 ng/ml (0.04-0.7), p<0.001; TGFb: 186 ng/ml (118-442) y 185 ng/ml (94.5-360); PDGF: 58.7 ng/ml (2-105) y 170 ng/ml (70-275), p<0.01. Los valores plasmáticos fueron: bFGF: 5.72 pg/ml (1-15.9) y 1 pg/ml (1-2.6), p=0.004; TGFb: 1738 pg/ml (996-2232) y 608 pg/ml (271-857), p<0.001; PDGF: 4339 pg/ml (272-6413) y 1795 pg/ml (612.7-3189), p=0.02. En conclusión, el incremento de bFGF y TGFb intraplaquetarios revelaría un aumento de la producción de estos factores. Los niveles elevados en plasma podrían deberse a liberación plaquetaria.
20. Oxido nítrico, disfunción endotelial y activación
plaquetaria en pacientes diabéticos tipo II. Noemí Zanaro, Susana
Ouviña, R.La Greca, Beatriz Sassetti Las complicaciones vasculares y la disfunción endotelial son eventos frecuentes en pacientes diabéticos tipo II (DMNID). Nuestro objetivo fue tratar de correlacionar óxido nítrico (NO), glucemia (G), insulinemia (I), hemoglobina glicosilada (HbA1c), factor von Willebrand (vWF-Ag) y activación plaquetaria. Se estudiaron 16 pacientes DMNID (edad: 62.2±10.5 años) con macroangiopatía e hipertensión moderada (JNCV) y 15 controles sanos comparables (C). Se determinaron los niveles plasmáticos de vWF-Ag, P-selectina soluble (s-Psel) e I por ELISA, NO sérico mediante el reactivo de Griess y HbA1c por MEIA y activación plaquetaria por la expresión de CD62P y CD63, utilizando citometría de flujo. Los resultados incrementados significativamente respecto de C (p<0.01) fueron (X±DS)= NO: 68.7±27.8µM (43.5±20.2), vWF-Ag: 200±40 U/dL (100±50), HbA1c: 11.2±3.1% (<8%), G: 11.7±5.1mmol/L (4.9±1.2), I: 12.1±8.0 UI/mL (10±7), CD62P: 45±5% (<5%), CD63: 20±5% (<5%), s-Psel: 48.9±21.6 ng/mL (29±11). Hallamos una correlación directa entre NO, G, HbA1c , CD62P y vWF-Ag (p<0.01) e inversa con I (p<0.05). En conclusión: los niveles elevados de NO, debidos a la probable activación de la NO sintetasa inducible, no fueron eficaces para prevenir la activación plaquetaria.
21. Acción del óxido nítrico (NO) sobre la producción de
megacariocitos (Mks), M. Schattner, A. Gorostizaga, M. G. Collado, R.
Pozner, C. Fondevila, M.A. Lazzari Se evaluó el efecto de diferentes dadores de NO: nitroprusiato de sodio (SNIP) e hidroxinitrosohidrazono (DETA) sobre la proliferación de Mks inducida por trombopoyetina. Se utilizaron células mononucleares (CM) de médula ósea humana y citometría de flujo para la identificación de los Mks. El cultivo de CM en presencia de DETA a 0, 60, 125, 250 y 500 mM mostró una disminución en el número absoluto de Mks (Xx103±ES) (328±68, 366±99, 234±102, 80±31 y 42±18 respectivamente, n=4). Esta disminución se asoció tanto a una menor cantidad total de células como a una menor frecuencia de Mks (%CD41a+). El tratamiento de las CM con SNIP también disminuyó el número absoluto de Mks (Xx103,n=2) (316, 252, 218, 165 y 215) pero esta disminución fue asociada a una menor frecuencia de Mks y no a una alteración en la proliferación celular. Estas diferencias entre ambos dadores de NO podrían ser debidas a un requerimiento de concentraciones más altas de SNIP cuya vida media es menor que la del DETA. El perfil FSC citofluorométrico también mostró una disminución significativa en el tamaño de los Mks. Los resultados sugieren una regulación negativa del NO en la megacarioci-topoyesis.
22. Rol de la glicoproteina Ib (gpib) en la interaccion
plaquetas PMN. N Maugeri, M A Lazzari Los PMN presentan sobre su superficie factor von Willebrand (vWf), el cual actúa como puente para el contacto con plaquetas. Nos propusimos evidenciar la participación de la GPIb utilizando un sistema de plaquetas y PMN lavados, incubados a 37°C, sin estímulo y sometidos a un shear rate equivalente a 250 s-1. La formación de agregados de plaquetas y PMN (APP) fue evaluada por citometría de flujo a doble color donde se determinó la presencia de plaquetas (CD42) en la región de PMN CD45 positivos. Los resultados (media±SEM) fueron: a) La formación de APP es nula en ausencia de agitación, b) Los APP se producen con células suspendidas en EDTA (18±2 vs 13±4% de AM, n=5) y c) El bloqueo de la GPIb con un MoAb (clon SZ1), inhibe la formación de APP (16±3 vs 7±2% de AM, p<0.001, n=5). Los resultados demuestran que las plaquetas utilizan la GPIb para unirse al vWf presente en la superficie leucocitaria durante la formación de agregados mixtos.
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