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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
METABOLISMO Coordinadores: H Rubbo, A Denicola 162. Relación entre susceptibilidad a la oxidación in vitro
(SOx) de HDL y su efecto sobre la oxidabilidad de LDL. Silvia
Sanguinetti, V Fasulo, F Brites, R Wikinski, L Schreier En trabajos anteriores demostramos que HDL protege a LDL frente a la oxidación in vitro con Cu2+. Las HDL más oxidables podrían ser menos eficientes en su función protectora. Nuestro objetivo fue estudiar la relación entre Sox de HDL y su capacidad de inhibir la oxidación de LDL (Inhib %), proveniente del mismo plasma. Se aisló LDL y HDL de plasma de 18 donantes por ultracentrifugación secuencial (d=1.019-1.063 g/ml y d=1.063-1.210 g/ml), respectivamente. Se incubaron: 1. HDL (20 mg proteína/dl); 2. LDL (10 mg/dl) y 3. HDL + LDL (20+10 mg/dl), con Cu2+10 mM, durante 2h, a 37°C. Se midieron Sustancias Reactivas al Acido Tiobarbitúrico (TBARS) en los 3 grupos. En 3. se descontó TBARS de HDL. TBARS expresados en nmol malondialdehído/mg proteína (Media ± ES, n=18) fue: 45±3.5, 81±9.3 y 51±7.5 en 1., 2. y 3., respectivamente. La Inhib % fue de 36.4±5.55%. TBARS-HDL correlacionó negativamente con Inhib % (r=-0.49, p<0.05). Se concluye que cuanto mayor es la oxidabilidad de HDL menor es su capacidad de inhibir la oxidación de LDL.
163. Reacciones oxidativas del óxido nítrico en la
mitocondria. FJ Schöpfer, CL Lisdero, MC Carreras, NA Riobó, P
Finocchieto, A Boveris y JJ Poderoso El óxido nítrico (•NO) aumenta la producción de anión superóxido (O2·-) y de peróxido de hidrogeno (H2O2) en las mitocondrias. La secuencia de reacciones sería: [1]•NO + QH2 ® Q"-+ NO-, [2] Q•-+ O2 ® O2- + Q, [3] O2-+O2- ® H2O2 + O2, and [4] •NO + O2- ® ONOO- (peroxinitrito). El objetivo fue relacionar el decaimiento del •NO (-d[NO]/dt), la producción de H2O2 (d[H2O2]/dt) y la formación de ONOO- con la concentración de ubiquinol en mitocondrias y partículas submitocondriales (PSM) de hígado. La adición de ubiquinona reducida por PSM aumentó 20% el -d[NO]/dt y el d[H2O2]/dt mientras que la SOD disminuyó en 30 % el -d[NO]/dt y en 66% el tiempo de inhibición por •NO de la citocromo oxidasa que fue revertido por SOD. El d[H2O2]/dt fue aumentado de manera dosis dependiente por •NO hasta los 3 µM, a concentraciones mayores decrece por la formación de ONOO-. Asimismo, observamos que el ONOO- oxida al QH2 de acuerdo a la reacción [5] ONOO- + QH2 ® "NO2 + Q•-.+ O2 ® O2- + NO2- + Q. Se concluye que la producción de O2·- en la mitocondria se debe a reacciones del •NO y el ONOO- con QH2 que controlan los niveles del •NO y sus efectos inhibitorios.
164. Reacción entre el ubiquinol y el peroxinitrito. FJ
Schöpfer, NA Riobó, MC Carreras, CL Lisdero, A Boveris, JJ Poderoso. La reacción entre el ubiquinol (QH2) y el óxido nítrico (•NO) produce anión nitroxilo y semiquinona y, en presencia de oxígeno, anión superóxido; la producción simultanea de •NO y O2·- tiene como principal producto peroxinitrito (ONOO-) (k=6.7x109 M-1seg-1). El propósito fue analizar una nueva reacción entre el ubiquinol y el peroxinitrito para formar como productos dióxido de nitrógeno y ubisemiquinona. El análisis espectrofotométrico demostró la oxidación del ubiquinol a ubiquinona por ONOO-. Se detectó por EPR la generación del radical libre intermediario ubisemiquinona. Se confirmó el efecto protector de 0-400 µM ubiquinol en la nitración de albúmina producida por 500 µM ONOO- por Western blot. El mismo efecto protector se evidenció a 0.3 y 0.5 mM ONOO- luego de la suplementación de partículas submitocondriales (4 mg/ml) con 0-100 µM UQ2 y 6 mM succinato/ 6 µM mixotiazol para asegurar su reducción. Finalmente, se determinó con un experimento de competencia simple con citocromo c, la constante de reacción del QH2 con ONOO- en 1.31 x 105 M-1 seg-1.
165. El ubiquinol previene el daño mitocondrial mediado por
peroxinitrito. CL Lisdero, FJ Schopfer, NA Riobó, MC Carreras y JJ
Poderoso. El oxido nítrico (NO) ha sido recientemente implicado en el control del metabolismo oxidativo mitocondrial. El NO promueve la liberación de anión superoxido a través de la reacción con el ubiquinol (UQ). El peroxinitrito, producto de la reacción del anión superoxido con el NO, reacciona a su vez con el ubiquinol, lo que puede disminuir la nitración de las proteínas mitocondriales. Así, el objetivo de este estudio fue comparar el daño producido por la endotoxemia sobre las mitocondrias de diafragma y corazón de rata, dos órganos que contienen distintas concentraciones tisulares de ubiquinol. La endotoxemia se indujo con una inyección i.p. de LPS (10 mg/kg). Se aislaron las mitocondrias del corazón y del diafragma y se analizaron: el consumo de oxígeno y estado de acoplamiento de la cadena de transporte de electrones con la fosforilación del ADP (control respiratorio), la producción de peróxido de hidrógeno (producido por dismutación de anión superoxido) y su correlación con la nitración de proteínas mitocondriales. Los resultados mostraron que las mitocondrias de diafragma (39,7 µgr UQ /gr de tejido) son más sensibles al daño oxidativo que las mitocondrias de corazón (114 µgr UQ/gr de tejido).
166. Daño pancreático en diabetes por estreptozotocina:
Influencia del óxido nítrico en los sistemas antioxidantes. Elida
Gonzalez, A Jawerbaum, V Novarro, D Sinner, J Roselló-Catafau, MAF
Gimeno. La destrucción pancreática por estreptozotocina (STZ) involucra distintas sustancias vasoactivas. Se estudia aquí la participación del óxido nítrico (NO) y su influencia sobre el estado oxidativo del tejido. Se determinaron niveles de nitritos/nitratos (N) (nmol/mg prot); actividad de óxido nítrico sintasa (NOS) (pmol NO/min. 100 mg ps) y niveles de superóxido dismutasa (SOD) (U/mg prot) en tejido pancreático de ratas sanas (C) y diabéticas por STZ (D). Los niveles de N fueron mayores en D (4.25±0.75, n=7) que en C (1.16±0.40, n=7)(p£0.05), al igual que la actividad de NOS (D: 0.30±0.03, n=7, C: 0.19±0.01, n=6, p£0.05). La actividad de SOD fue menor en D (15.2±1.6, n=6) que en C (27.0±1.2, n=6) (p£0.01). La preincubación con nitroprusiato de sodio 600 mM (dador de NO), disminuyó los niveles de SOD en ratas C (14.6±1.3, n=7, p£0.01). En D, la presencia de L-NMMA 600 mM (inhibidor de NOS), aumentó los niveles de SOD (24.5±2.5, n=7, p£0.05). Estos resultados parecen indicar que a) Los niveles de NO se incrementan durante el desarrollo de la lesión pancreática. b) El aumento de NO parece estar relacionado con la disminución en la capacidad antioxidante del tejido durante el daño químico.
167. Metabolismo del complejo
a2-macroglobulina-monofluor-fosfato de sodio (a2M-MFP) en la rata. L
Esteban, Laura Pera, A Rigalli, RC Puche El complejo a2M-MFP se forma en plasma despues de cada dosis de
MFP. Esta proteína pierde actividad y es reconocida y metabolizada
por proteolisis vía receptores tisulares. Este proceso aumenta la
biodisponibilidad del flúor del MFP. Se midió el clearance
plasmático de a2M-MFP en 20 ratas de 200g que recibieron 80 mmoles de
MFP por vía oral, antes (0.013±0.004 min-1) y después
(0.011±0.008) de anular la circulación hepática (ligadura del
tronco celíaco y vena porta). En otro experimento se trataron ratas
con 80 mmoles de NaF ó MFP/día/30 días. Como el flúor óseo total
fue mayor en las ratas tratadas con MFP que con NaF (13.9±2.7 moles/g
vs. 2.9±2.5, P<0.01) se analizaron las proteínas (no colágenas)
extraídas del hueso, identificándose proteínas (2200 a 60000 Da)
con flúor ligado, sólo en los animales tratados con MFP. Se concluye
que la depuración hepática del complejo es poco significativa. La
presencia de proteínas y péptidos con flúor ligado en la matriz
ósea indica la importancia de este tejido en el metabolismo del
complejo. |
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