RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES

RIÑON II - FISIOPATOLOGIA RENAL
Coordinadores: E Arrizurieta, I Armando

186. Caracterización de la membrana basal glomerular (MBG) en la glomerulopatía inducida por HgCl2 en ratas. E Botta, G Girardi
Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, UNR-CIUNR-CONICET, Rosario

Previamente demostramos que las ratas tratadas con HgCl2 (5mg/kg, s.c.) desarrollan a la hora de su administración una insuficiencia renal aguda con compromiso glomerular, caracterizada por alta infiltración leucocitaria en glomérulos aislados (GA) y marcada albuminuria. Objetivo: caracterizar la MBG en animales intoxicados con HgCl2. Se trabajó con 2 grupos experimentales: control (C) y Hg. Se determinó: a) permeabilidad a la albúmina (Alb) en GA, b) electroforesis de orina, GA y MBG e identificación de fibronectina (Fn) y laminina (L) por western blot, c) ácido siálico (AS) en GA, d) glicosaminoglicanos (GAG) en orina. Resultados: a) Los GA del grupo Hg sometidos a medio hipotónico mostraron poco cambio de su sección de superficie glomerular (SSG) a diferencia de los C (DSSG%: C(n=7):49±3; Hg(n=5):10.5±0.6), esto indicaría una salida de Alb hacia el medio. b) Las orinas del grupo Hg presentaron un aumento de Alb. Los GA C mostraron una banda de Alb no presente en el grupo Hg. La MBG del grupo Hg mostró un mayor contenido de Fn que el C, las bandas de L no difirieron. c) El contenido de AS en el grupo Hg fue menor que en el grupo C, sugiriendo pérdida de cargas negativas (AS(mg/mg prot): C(n=6):77.9±3.7; Hg(n=5):13.2±0.8). d) Las orinas del grupo Hg mostraron niveles más altos de GAG que el C (GAG (nmol/mg prot): C (n=5): 17.6±1.2; Hg (n=5): 94.8±4.3). Conclusión: existe una alteración estructural y funcional de la MBG en la glomerulopatía inducida por HgCl2 debido probablemente a la pérdida de cargas negativas (GAG y AS).

187. Inmunomarcación de a-SM-actina y TGb1 en tejido renal de rata diabética. Jorge Toblli, I Stella, M Angerosa, C Nyberg, L Ferder, F Inserra
Laboratorio de Medicina Experimental Hospital Alemán & CIMAE, Buenos Aires

El objetivo de este estudio fue valorar la utilidad de la marcación con b-SMactina (SMA) y TGb1 como indicadores de fibrogénesis en riñón de ratas con diabetes mellitus (DM) por Streptozotozima (STZ), no controlada. Se utilizaron machos adultos S-D (250-300g) en dos grupos. G1(n=12)Cont. y G2(n= 12)DM. El G2 con STZ 65mg/kg/intraperitoneal, y el G1 vehículo. Mensualmente se controló glucemia (Glu), Creatininemia (Cr) y proteinuria (PrU). Ningún animal recibió insulina. Al 6to. mes se efectuó estudio anatomopatológico (inmunomarcación con anti-SMA y anti-TGb1). Según score (0-3) se evaluó: 1) Lesiones Glom. (LG), 2) Tubulointerst.(LTI) y 3) expresión de SMA y TGb1. Resultados (x ± SD) Glu (mg/dl) G1: 136,6± 4,4; G2: 688,6±118 (p>0,001); Cr (mg/dl) G1: 0,6±0,02 G2: 0,9±0,05 (p>0,001). PrU (mg/día) G1: 2,3±0,8; G2: 24±2,1 (p>0,001), LG G1: 0,04±0,14; G2: 0,96±0,4 (p>0,001); LTI G1: 0,04±0,14; G2: 0,33±0,25 (p>0,001); SMA glom. G1: 0,08± 0,19 G2: 1,71±0,62 (p>0,001); SMA TI G1: 0,04±0,14; G2: 1± 0,33 (p>0,001); TGb1 glom G1: 0,08±0,19; G2: 1,33±0,39 (p> 0,001); TGb1 TI G1: 0,17±0,33; G2: 1,13±0,38 (p>0,001). Estos datos sugieren la utilidad de la marcación con SMA y TGb1 en el diagnóstico de daño renal incipiente en DM no controlada.

188. Modificación de fluidez de membrana y de niveles de lipoperoxidación en membranas apicales de riñón isquémico de rata. Adriana M Torres, Georgina Montagna, CG Hofer
Farmacología, Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas UNR, Rosario

Trabajos anteriores demostraron que la isquemia renal modifica las actividades de enzimas en membranas apicales renales de rata (MAR). El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la isquemia sobre otros parámetros de funcionalidad de MAR. Se trabajó con ratas Wistar macho adultas. Se prepararon MAR a partir de: I) riñones controles (C; n=3), II) riñones extraídos luego de un período de isquemia (clampeo de arteria renal durante 50 minutos, Is, n=3), III) riñones contralaterales del grupo II (CL, n=3). Se determinaron Lipoperoxidación (LPO, pmoles MDA/mg Prot.), Anisotropía (r), Recuperación Proteica (%RP), niveles de Acido Siálico (AS) y de Sulfidrilos Proteicos (SP). Los resultados obtenidos fueron: LPO: (C: 1.03±0.26, CL 1.88±0.64, Is: 3.78±0.21*), r: (C: 0.2003±0.0014, CL: 0.2010± 0.0018, Is: 0.1819±0.0022*) [* p<0.05 vs C]. No se observaron diferencias entre grupos en %RP, AS, y SP. Estos resultados demostrarían que la isquemia renal aumenta los niveles de LPO y la fluidez de membrana en MAR lo que podría condicionar la funcionalidad de proteínas presentes en la membrana. La no modificación de %RP, AS, y SP sería una evidencia preliminar en favor de la no pérdida de unidades proteicas en MAR luego de 50 minutos de isquemia.

189. Regulacion de la expresion y actividad de la Na+,K+-ATP asa(NKA) en la insuficiencia renal cronica (IRC). Claudia Bertuccio, LF Obika, F Ibarra, J Toledo, Elvira Arrizurieta, RS Martin
Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires

Estudios previos de nuestro laboratorio han demostrado que el asa gruesa medular de Henle (mTAL) sufre un proceso adaptativo en la IRC caracterizado por un aumento en el nivel basal de cAMP, probablemente inducido por un aumento de la vasopresina (VS). Con el objeto de investigar si la actividad y la expresión de la NKA están también aumentados en la IRC, se usaron liberación de 32P y Western blot en membranas y homoge-natos, respectivamente, en la médula externa de ratas C y con IRC. Los resultados indicaron que la actividad de NKA en C fue de 34±5 y en IRC de 53±7 mmolPi/mg prot/h (p<0.05) y la densidad óptica (DO/mm2)de la banda correspondiente a la subunidad alfa 1 (aprox 110 kDa) fue de 0,54±0,08 en C y de 0,88±0,17 en IRC (p<0,05). Cuando se las trató con OPC 31260 (inhibidor del receptor V2) se observó un cambio no significativo en las IRC a 1,08±0,11 DO/mm2. Adicionalmente fue explorada la expresión de NKA en homogenato de corteza de C e IRC, no encontrándose diferencias significativas. Conclusión: en el proceso adaptativo del mTAL en la IRC existe un aumento de la expresión y de la actividad de NKA que parece estar restringida a la médula externa.

190. Estudio de las alteraciones provocadas por acetaminofeno (APAP) en el epitelio tubular renal. laura trumper, Gabriela Coux, M Mónica Elías.
Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR., Rosario, CIUNR-CONICET

Luego de 16 hs de la administración de APAP (1000 mg/kg p.c., i.p.) a ratas Wistar macho adultas, aparecen alteraciones tubulares. Analizamos los cambios en el epitelio tubular renal a partir del estudio de enzimas marcadoras. Partiendo de homoge-nados de corteza (H) se obtuvieron membranas basolaterales (BLM) y de ribete en cepillo (BBM).Se consideraron a las fracciones 2 y 3 como representativas de BLM y a 6 y 7 como representativas de BBM. Se realizaron preparaciones con riñones: i) controles (C), ii) intoxicados con APAP durante 1 hora (APAP1h), iii) intoxicados con APAP durante 16 horas (APAP16h). En BLM, aumentó la actividad de Na,K ATPasa a la hora y disminuyó a las 16 horas (C=80.8±5.0, APAP1h=100.9±7.0*, APAP16h= 62.07±5.4* mmol Pi/h/mg prot,*p<0.05) En BBM hubo una tendencia a aumentar la actividad en APAP1h.Estos resultados se corroboraron con Western blot.APAP inicialmente provocaría un aumento en la Na,K ATPasa, que se ubicaría en BLM y en BBM, mientras que luego de 16 horas habría una disminución en cantidad y actividad de la enzima que se correlacionaría con las alteraciones funcionales observadas.

191. Crecimiento renal (CR) y control de la presión arterial media (PAM) en ratas macho (M) y hembra (H). Relación con kalikreina urinaria (KU) FR Ibarra, Elisabet M Oddo, J Toledo, Adriana R Scerbo, RS Martin, Elvira E Arrizurieta.
Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari, Facultad de Medicina,Universidad de Buenos Aires

La función renal decrece con la edad en M y H. La capacidad de crecimiento del tejido renal difiere en M y H. En este trabajo se efectuó uninefrectomia (uNx)en dos grupos (G):A 5 d de vida y B 90 d de vida en M y H, que se estudiaron desde los 60 a los 360d. Se evaluaron peso renal (pr), PAM y KU. El CR remanente, estimado por la relación pr / peso corporal, fue del 84% en M y H del GA y M del GB. Las H del GB tuvieron un CR menor(64%p< 0,02). La PAM mostró valores similares en M y H controles,H118±3,4 M 122±4,6 mmHg(NS). En uNx, los M mostraron un aumento de la PAM a los 360d:135±3,5 mmHg vs C,p<0,05. En H uNx 150d en A y B la PAM descendió a 104±4,5 mmHg, p<0,05. La KU(nkat/gpr) en C no varió entre M y H,37±3 vs 33±3.5,NS. En uNx las KU disminuyeron en MA o B 12 ±2,1 y 17±1,9p<0.01. En las HA o B no variaron, 22±3,8 y 29±11,6 NS. En ratas H GB 150d C y uNx se utilizó aprotinina (APR), inhibidor de K,ip por 4 d. Las C no variaron la PAM pero en uNx la PAM ascendió a 130±4 p<0.01vs uNx sin APR. Las ratas H adultas tienen una menor capacidad para regenerar masa renal que las M o H jóvenes. Controlan la PAM elevando la Kalikreina. Estos fenómenos podrían ser regulados por hormonas sexuales.