|
|
|
||||||
|
|
|||||||
|
RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
TRANSPORTE 119. Activación osmótica del intercambio Na+/H+ en plaquetas
humanas. OA Gende. Cuando las células se exponen a soluciones hipertónicas se produce un rápido encogimiento seguido por la activación de mecanismos de regulación del volumen. En plaquetas sanguíneas cargadas con el indicador fluorescente BCECF se observó que el intercambiador de Na+/H+ (NHE) es activado por el encogimiento osmótico. En solucion salina hipertónica por agregado de 200 mmol/l de manitol, el cambio de pH intracelular luego de 500 segundos (DpHi) fue de 0.10 ± 0.01; de -0.05 ± 0.02 en soluciones isotónicas y de -0.08 ± 0.03 cuando se inhibió el NHE (p> 0.05). La eliminacion del calcio no afectó la activación osmótica del intercambiador (DpHi = 0.10 ± 0.03). La estimulación del NHE fue inhibida por preincubación con W7, un antagonista de calmodulina ( DpHi = -0.01 ± 0.01) y con ML7, un inhibidor de la quinasa de la cadena liviana de miosina ( DpHi = 0.06 ± 0.03) mientras que con celeritrina, un inhibidor de PKC, no se observan cambios significativos. Se concluye que la activación osmótica del NHE involucra una vía de fosforilacion independiente de calcio.
120. Evidencia del control neurogénico de los canales de calcio
voltaje dependientes (CCVD). S Muchnik, Adriana Losavio, Julieta
Cassone, Haydeé Comar. El rol de los CCVD de tipo L y de tipo N sobre la liberación espontánea de neurotransmisor ha sido establecido en mamíferos adultos. El propósito del presente trabajo fue investigar este papel desde momentos precoces postnatales donde la inervación está recientemente establecida, hasta la adultez. Se estudió el efecto de la nitrendipina 5 mM, bloqueante de los CCVD tipo L sobre la frecuencia de los potenciales de placa miniatura (fMEPPS) en diafragma de ratones CF1 desde el día cuarto al día 40 post-natal (DPN). Los resultados mostraron que: 1- En los primeros DPN el potencial de membrana estaba disminuído (mV -56.7 ±3.4 (5) vs -66.7± 4.1 (6), p<0.008), la duración de los MEPPs estaba prolongada (T50% ms: 12.4±2.93 (15) vs 4.53 ±1.09 (19) y la fMEPPs era un orden menor que los adultos (0.12/seg ±0.04 (5) vs 1.55/seg ±0.25(4), p<0.001); 2- Los efectos descriptos tienden a ser similares a los adultos controles luego del 15 DPN. 3- Durante los primeros DPN la nitrendipina redujo fMEPPs un 7.8 ± 9.1 % (5), siendo ese efecto menor que el observado con la misma droga en ratones adultos (40 DPN, 35.1±2.9 % (4), p<0.001). Los cambios precoces observados en (1) están descriptos como reiner-vatorios tempranos. El hecho que la magnitud de la población de CCVD tipo L siga un curso similar hacia la normalización como los demás parámetros, sugiere su dependencia de un control neurógeno, y/o la presencia de una población de CCVD resistentes a la nitrendipina, o la predominancia de otro tipo de CCVD.
121. Permeabilidad al agua del recto de mamífero. Arlinet
Kierbel1, Claudia Capurro1 , Monique Pisam2, S. Nielsen3, M. Parisi1. El objetivo del trabajo fue determinar las bases funcionales, estructurales y moleculares de la permeabilidad al agua del epitelio rectal de mamífero. Se midieron simultáneamente, en el epitelio aislado del recto de conejo (n=8), los valores basales de flujo neto de agua (Jw, ml/min.cm2, +0,21±0,08); (en la rata -0,25±0,12), permeabilidad al 14C-manitol (Ps, cm.s-1, 2,75±0,35.10-7), dif. de potencial (17,2±5,1 mV), corriente de cortocircuito (76±29 mA/cm2) y resistencia (141±22 W. cm2). Al aumentar la osmola-ridad serosa se observó un aumento simultáneo y transitorio del Jw (+0.51±0,09) y de la Ps (+4,6±0,43.10-7). En una segunda fase se observó un aumento lento y HgCl2 sensible del Jw mientras la Ps disminuyó. Estudios de críofractura y microscopía electrónica mostraron que, cinco minutos después del aumento de la osmolaridad serosa (pero no mucosa), las células epiteliales (tanto en rata como en conejo) aparecen marcadamente encogidas y los espacios intercelulares abiertos. Estos resultados sugirieron la presencia de canales para agua en las células epiteliales. La presencia de canales para agua en la membrana basolateral (acuaporina 3) fue demostrada por inmunohistoquímica en el epitelio rectal de la rata.
122. Movimiento de agua y pH intracelular en células T84.
Roxana Toriano1, M A Ramirez2, G Malnic2, M Parisi1 Objetivos: Estudiar el acoplamiento agua-iones durante la secreción, en una linea celular (LC) derivada del colon humano. Métodos: la LC fue cultivada sobre soporte permeable y se midió la corriente de corto circuito (CCC, mA.cm-2), el flujo neto de volumen (Jv, ul.min-1.cm-2) y el pH intracelular (emisión de fluorescencia a 495/440 nm tras incubación con BCECF). Resultados: Se observo un Jv espontáneo de secreción de -0,16 ± 0,02 (n=12) y una CCC de 1,55 ± 0,23 (n=8). El VIP (10-8M), una sustancia que eleva el AMPc intracelular, incrementó la CCC a 36,73 ± 1,73 sin modificación del Jv. Por el contrario la bumetanida (10-5M), un inhibidor del cotransportador 2Cl-/Na+/K+, inhibió el Jv secretorio (-0,03 ± 0,03) sin afectar la CCC. Finalmente la toxina termoestable de Escherichia coli (0,5 ug.ml-1) produjo un fuerte incremento de la CCC (18,85 ± 4,31) y del Jv (- 0,34 ± 0,06). El pH intracelular control fue de 7,25 ± 0,32, (n=21). Tras acidificación por pulso de NH4+ la recuperación fue 100% Na+ dependiente. Conclusiones: La secreción de H2O no está siempre asociada a un movimiento iónico electrogénico siendo posible un rol para los inter-cambiadores Na+/H+ y/o Cl-/HCO3- en el acoplamiento agua-transporte iónico.
123. Regulación hormonal del transporte asociado de agua e
iones en una nueva línea celular de origen renal (RCCD1). 1V.
Rivarola, 2M. Blot-Chabaud, 2N. Farman, 1M. Parisi y 1C. Capurro. El objetivo de este estudio fue caracterizar la regulación hormonal por la AVP (Arginina-vasopresina) del transporte hidrosalino en una línea celular de túbulo colector cortical de rata (RCCD1). La medida del flujo neto de agua transepitelial (Jw, ml/min) se realizó en células cultivadas sobre soporte permeable, en paralelo con la medición de los parámetros eléctricos (Isc). Los resultados muestran que estas células presentan una secreción espontánea y mantenida a lo largo del tiempo (-0.725 ± 0.098, n=13). El agregado de AVP (10-8 M) induce, a “corto plazo” (20 min), una reducción significativa de la secreción basal (-0.09 ± 0.076, n=7), asociada a un incremento en la corriente de corto-circuito (DIsc: 2.24 ± 0.44 mA.cm2). Este efecto es bloqueado por el agregado de amiloride o DPC (inhibidores de canales de Na+ y Cl-). De estos resultados concluimos que la AVP induce, a “corto plazo” un aumento de la reabsorción de agua acoplada a Na+ y Cl-. A “largo plazo” (7,5 hs) la AVP indujo un incremento en la síntesis de novo del canal de Na+, de la bomba Na/K/ATPasa y del CFTR, como muestran los estudios de inmunoprecipitación. Esto se tradujo en un incremento en la absorción de sodio y en la secreción de Cl-, en paralelo con un aumento significativo del Jw secretor (-1.180 ± 0.092, n=11), sensible a glibenclamide (inhibidor del CFTR). Concluimos que la AVP regula diferencialmente el transporte de agua-iones a “corto y largo plazo”.
124. Corriente inducida por cafeína (CIC) en músculo
esquelético de anfibio. BA Kotsias, RA Venosa La activación del intercambiador Na+/ Ca2+ (INC) en músculo
esquelético requiere un aumento de [Ca2+]i (con 4 mM de cafeína,
CAF). El INC es electrogénico (3 Na+: 1 Ca2+) en la mayoría de las
células. De acuerdo a esto, en sartorio de rana con el INC en modo
normal (Na+e / Ca2+i; corriente despolarizante), la despolarización
con 50 mM de K+ redujo el incremento en el flujo de Ca2+ por CAF de
67±4 a 20±3 %. Ni2+ (5mM) es un bloqueador de la corriente del INC.
Contra lo esperado, Ni2+ duplicó el eflujo de 45Ca2+ CAF dependiente
(p=0.002); CAF además aumentó el influjo de 63Ni2+ de 0.7±0.2 a
2.5±0.2 pMol.cm-2.s-1. Se estudió la CIC en fibras cortas
lumbricales de sapo (potencial de mantenimiento = -60 mV). Para ello,
la movilidad de las fibras se redujo con 5 mM de 2,3 butanodione
monoxime. Ni2+ redujo la CIC de 4.13 ±0.48 (control) a 2.13±0.41
µA.cm-2. El efecto fue similar al de 0 Na+ o con amiloride 5 mM. Esto
y las mediciones de flujos sugieren que en presencia de Ni2+ el INC
pasaría de un modo electrogénico 3 Na+: 1 Ca2+ a 1Ni2+:1 Ca2+
(neutro). CAF también aumenta el eflujo de K+ y el aumento de [K+]0
en la cara externa del sarcolema se nota como una corriente
despolarizante que correspondería a la fracción no inhibible de la
CIC. Así, el incremento de [K+]0 de 2.5 a 10 mM se expresó como una
corriente hacia adentro de la fibra de 0.57±0.42 µA.cm-2.
Conclusión: la despolarización por CAF se debería en parte a la
corriente del INC y en parte, posiblemente a un aumento de [K+]0 en
contacto con la superficie externa del sarcolema. |
|||||||