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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES EN POSTERS
ENDOCRINOLOGIA: OVARIO Y
TESTICULO 436. Localización inmunocitoquímica ultraestructural de
3b-hidroxi esteroide deshidrogenasa (3b HSD) en células de Leydig de
rata y sus precursores. Mariana Musse, Eliana Pellizzari, Marcela
Venara, Selva Cigorraga, H Chemes. Los precursores inmaduros (PI) de células de Leydig (CL) secretan testosterona y poseen enzimas esteroidogénicas y receptores a LH, pero presentan una disminución de la sensibilidad y la respuesta máxima a la estimulación con hCG en relación con las de CL diferenciadas. Hemos localizado por inmunocitoquímica ultraestructural la 3b-HSD en CL y PI de rata usando un anticuerpo policlonal y un sistema de revelado con peroxidasa. Las CL diferenciadas evidenciaron un abundante retículo endoplásmico liso (REL) dentro de cuyas cisternas se observó una intensa localización de la enzima, mientras que las mitocondrias, gotas lipídicas y núcleos fueron negativos. Los PI mostraron un aspecto ultraestructural indiferenciado, con escaso desarrollo del REL. La 3b HSD se localizó de manera difusa en el citoplasma, sin relación topográfica con el escaso REL. El sitio clásico de localización de esta enzima es la membrana microsomal en la que se halla asociada a otras enzimas esteroidogénicas. La particular localización fuera del REL (de la 3b HSD en PI), podría ser responsable, al menos en parte, de la disminución en la capacidad esteroidogénica de este tipo celular.
437. TNFa en medio condicionado de macrofagos testiculares de
ratas con orquitis auto-inmune. MO Suescun1,2, RS Calandra2,3, B
Denduchis4, L Lustig4 Previamente demostramos que el medio condicionado (MC) de macrófagos testiculares de ratas con orquitis autoinmune experimental (OAE) modula la producción in vitro de testosterona. Ratas Sprague-Dawley adultas, fueron inmunizadas con homogenado testicular y adyuvantes. En el 65% de las mismas se indujo una OAE severa a los 80-130 días de la primera inmunización, caracterizada por descamación del epitelio germinal, atrofia tubular y aumento del número de macrófagos, linfomonocitos y células de Leydig. Se aislaron macrófagos testiculares y peritoneales de ratas con OAE y ratas controles. Se determinó TNFa por ELISA en el MC de macrófagos luego de 24 hs de cultivo. Los resultados muestran un aumento significativo (p<0.05) en el contenido de TNFa en el MC proveniente de macrófagos testiculares de ratas con OAE (244 ± 19.5 vs C:167 ± 13.7 pg/ml).En presencia de LPS se observó un incremento similar. Este efecto no fue observado con el MC de macrófagos peritoneales. El aumento de TNFa detectado sugiere que esta citoquina, que es secretada por los macrófagos, está involucrada en la modulación local de la esteroidogénesis de la célula de Leydig .
438. Elementos neuronales testiculares en el mono. Mónica
Frungieri1, 2, H Urbanski3, R Calandra1, A Mayerhofer2. Recientemente se describió la presencia de células similares a neuronas (CSN) catecolaminérgicas (cat) en testículos prepuberales del mono Rhesus (Mayerhofer y col., Biol.Reprod. 55:509,1996).El presente es un estudio inmunohistoquímico ontogénico (1/2,1,2, 3,6 y 30 años;n=5/grupo) de la naturaleza, distribución y frecuen cia de elementos neuronales en testículos de mono Rhesus. Fibras nerviosas (FN) y CSN de fenotipo elongado bi/multipolar inmunoreactivas para el neurofilamento 200 (marcador neuronal), tirosina hidroxilasa y neuropéptidos NPY y VIP,fueron localizadas en el espacio perivascular,en la pared tubular y próximas a células de Leydig. Se observaron FN a todas las edades aunque predominaron luego del aumento de la LH sérica (1-2 años: 0.06 ± 0.01; 6-8 años: 0.15 ± 0.01* FN/túbulo,*:p<0.05).En cambio, sólo se detectaron CSN en testículos inmaduros. Estos resultados evidencian la existencia de plasticidad neuronal en el testículo e indican que CSN cat/peptidérgicas podrían participar en la regulación de los eventos que conducen a la eclosión de la pubertad en el mono.(Subsidios de DAAD,DFG,Volkswagen-Stiftung, NIH).
439. La influencia colinérgica al final de la preñez no
modifica la liberación de Progesterona ovárica. M Casais, AM
Rastrilla, L. Aguado. Trabajando con el sistema in vitro Ganglio Celíaco-Nervio Ovárico Superior-Ovario, estandarizado en nuestro laboratorio, se ha demostrado que estimulando el ganglio, tanto con agentes adrenérgicos como colinérgicos, se modifica la liberación de progesterona (P) ovárica. El objetivo presente fue estudiar la influencia colinérgica al final de la preñez en la rata. Se adicionó acetilcolina (Ach), atropina (At) o hexametonio (C6) 10-6 M al ganglio y se dosó P ovárica a los 30, 60, 120 y 180 minutos por RIA. Test de Student-Significancia p<0.05. Los resultados indicaron que a pesar de existir un tono colinérgico inhibitorio sobre la liberación de P a los 15 días de preñez (resultados ya publicados), el mismo iría desapareciendo a medida que la preñez avanza. Así podemos mostrar que tanto Ach (0.25±0.02; 0.18±0.02; 0.05±0.008 ), At (0.21±0.02; 0.14±0.01; 0.08±0.01), y C6 (0.18±0.03; 0.23±0.03; 0.07±0.02), no presentan mayores variaciones respecto de los basales de día 19 (0.21±0.006), 20 (0.17±0.01) y 21 (0.04±0.005) respectivamente. Se concluye que posiblemente el tono colinérgico sería importante durante la funcionalidad del cuerpo lúteo pero no al final de la gestación.
440. Modulación Neural del efecto de LH sobre el Cuerpo Lúteo
de la Preñez. M Casais, AM Rastrilla, L Aguado A fin de estudiar la regulación neuroendocrina a nivel periférico, el objetivo del presente trabajo fue analizar cómo la acción de agentes adrenérgicos en ganglio celíaco modifica la aparente inactividad de LH sobre la liberación de progesterona (P) ovárica a los 15 días de preñez en la rata. Para ello, se usó el sistema integrado in vitro Ganglio Celíaco-Nervio Ovárico Superior-Ovario (GC-NOS-O), donde el GC y el O ocupan celdas de incubación separadas y permanecen unidos por el NOS, metodología descripta en trabajos previos. En la celda ganglionar se adicionó, noradrenalina (Ne) ó fentolamina (Ph) ó propranolol (Prop), en concentración 10-6M, y en la ovárica, LH 50ng/ml. La P liberada se determinó por RIA, a los 30, 60, 120 y 180 minutos. Se utilizó Test de Student-significancia p<0.05. Los resultados, teniendo en cuenta los valores basales (sistema no estimulado) y el control LH (sólo LH en ovario) indicaron que los niveles de P no se modifican (0,30±0,04 vs 0,29±0,02). A partir de la acción conjunta de LH y los agentes adrenérgicos, tanto Ne como Ph provocan una disminución en la liberación de P en relación al control LH (0,18±0,008 vs 0,29±0,02 p<0,001 y 0,15±0,02 vs 0,29±0,02 p<0,001) respectivamente, mientras Prop no modifica la liberación de P (0,25±0,02 vs 0,29±0,02). Se concluye que el efecto adrenérgico por vía neural condiciona la acción de la LH sobre el cuerpo lúteo de preñez.
441. Competencia entre adrenalina intracerebroventricular y LH
endovenosa sobre la liberación de progesterona ovárica de rata en
diestro 2. MA De Bortoli, M Garraza, L Villegas, L Aguado Adrenalina (Ad) inyectada en ventrículo cerebral (icv) disminuye la progesterona en sangre de vena ovárica (Po), entre 1 y 25 min. después, en ratas en diestro 2 (D2). En este trabajo se investigó la competencia entre el efecto central de adrenalina icv, que llega al ovario por el nervio ovárico superior, y el de LH circulante en D2. Se determinó una dosis de LH ovina (LHo=2 µg) que, inyectada endovenosa (iv), aumentó la Po a 151 ± 18 ng/ml (media ± SEM). En el esquema A, ratas en D2 fueron inyectadas icv con 5 µg de Ad y, 3 min más tarde, con LHo iv. En el esquema B, ratas en D2 fueron inyectadas con LHo iv y, 7 min más tarde, con Ad icv. En ambos esquemas se colectó sangre de vena ovárica izquierda durante 25 min y se dosó Po por RIA. Resultados: (media ± SEM ng/ml) Po basal: 39,8±1,65. En A, la Po disminuyó hasta los 3 min (p<0,01) (momento de la inyección iv de LH) y luego aumentó hasta 64±7,5 a los 25 min. En B la Po aumentó hasta los 7 min (p<0,001) (momento de la inyección icv de Ad), luego disminuyó hasta los 11 min, para aumentar nuevamente hasta alcanzar a los 25 min 70±8,9. Conclusiones: el estímulo adrenérgico central, depresor de la liberación de progesterona ovárica en diestro 2, compite con el efecto estimulador de la LH exógena que actuaría a nivel periférico.
442. Efecto de la sección del Nervio ovárico Superior sobre la
esteroidogénesis in vitro en el primer ciclo estral. M Forneris, M
Lafarque, L Aguado Hemos observado previamente que el corte del nervio ovárico superior en ratas de 4 días de edad (NOS) provoca atraso de la apertura vaginal y cambios hormonales durante el desarrollo Objetivo: evaluar el efecto de la denervación en la liberación de esteroides en respuesta a gonadotrofinas y agentes adrenérgicos in vitro. Se trabajó con ratas NOS y controles (C) sacrificadas en el primer Estro (E), Diestro (D) y Proestro (PE). Se colectó sangre y los ovarios se incubaron en solución Krebs-Ringer con o sin LH (50ng/ml) o FSH (50ng/ml) o Isoproterenol (Iso/ 10-6 M) por 3 hs a 37°C. Se determinó progesterona (P) y estradiol (E2) por RIA. Niveles séricos de P (ng/ml) y de E2 (pg/ml) en el grupo NOS aumentaron respecto a sus (C) en D y PE (p<0,01). In vitro, ratas NOS respecto a sus (C); Liberación de P (ng/mg ovario): Basal: aumentó en D (p<0,05). +LH: no hay cambios en el ciclo. +FSH: disminuyó en PE y E (p<0,001) y aumentó en D (p<0,01), +Iso: disminuyó en E, PE y aumentó en D (p<0,01). Liberación de E2 (pg/mg ovario): Basal: aumentó en PE y E (p<0,01). +LH aumentó en D y PE (p<0,001) y E (0,05). +FSH: aumentó en E y PE (p<0,005). + Iso: aumentó en D, PE y E (p<0,01). Con las estimulaciones efectuadas, a excepción del D, en ratas NOS, se observó disminución en la liberación de P y aumento en la liberación de E2 en todos los estados.
443. El gen bcl-X y su expresión hormono-dependiente. R Sieira,
JL Barañao, A Pecci En endometrio, la caída de los niveles de progesterona (Prog.) durante la fase secretoria conduce a la apoptosis del epitelio uterino. La muerte celular depende de la abundancia relativa de las proteínas de la familia de Bcl-2. Bcl-X, perteneciente a dicha familia, genera por splicing alternativo dos isoformas: Bcl-Xl, que inhibe la muerte celular y Bcl-Xc que la promueve. Resultados previos realizados en una línea celular de endometrio de rata (RENTROP) demostraron que el tratamiento con Prog. y/o dexametasona (DEX) incrementa los niveles de mRNA de dicho gen. En este trabajo se caracterizó la región promotora del mismo. La estructura del gen reveló la presencia de cinco promotores alternativos distantes a : -149 pb (P1), -656 pb (P2), -1.8 kb (P3), -2.7 kb (P4) y -3.4 kb (P5) respecto del codón de iniciación de la traducción. Por “primera extensión” se observó que la actividad de dichos promotores varía según el tejido analizado, siendo P2 y P5 los más activos en útero. Dicha actividad fue confirmada mediante transfecciones transientes en células RENTROP. Por otro lado, el tratamiento con Prog. + DEX indujo 5 veces la actividad transcripcional de P1, P2 y P3 sugiriendo que el aumento en los niveles de mRNA serían debidos a la inducción de la expresión génica.
444. Cambio del efecto adrenérgico en ratas androgenizadas y
con denervación ovárica neonatal. M Rastrilla, Forneris, L. Aguado Las células teco-intersticiales del ovario poseen dos vías de
estimulación: una hormonal y otra neural a través del nervio
ovárico superior (NOS). Es conocido que la androgenización neonatal
y la sección del NOS producen hipertrofia intersticial. El propósito
del presente trabajo fue estudiar si este efecto es modificado por la
estimulación adrenérgica in vitro. Se utilizaron ratas de 4 días de
edad. Grupo I: con administración de Testosterona (T); 1,5 mg/0,1 ml
veh. oleoso vía s.c. y Grupo II: T y corte adicional del NOS. Los
animales fueron sacrificados a los 30 días de edad, se colectó
sangre troncal y los ovarios incubados en solución Krebs-Ringer
bicarbonato con o sin Isoprote-renol (Iso/ 10-6 M), 3 hs a 37°C. La
liberación de progesterona (P) y estradiol (E2) en el medio se dosó
por RIA. Iso provocó un aumento de la liberación de P (ng/mg ovario)
y E2 (pg/mg ovario) en ambos grupos (p<0,001): En los niveles circulantes de P y E2 se observó un aumento en el grupo II de P (p<0,005) y E2 (p<0,001) . Conclusión: es probable que los efectos descriptos para la androgenización neonatal con T se produzcan a nivel central o periférico pero no en el ovario.
445. Modulación neural del efecto de LH sobre la secreción de
esteroides ováricos en Diestro. Z Sosa de Gil, SM Delgado, L Aguado El pico de LH importante en procesos de ovulación y luteinización conduce a la activación de señales que estimulan la síntesis de Progesterona (P). El objetivo fue estudiar los efectos de Noradrenalina (NA), Propranolol(Prop) y Fentolamina (Fen) en concentracion final 10-6 M en ácido ascórbico en la celda ganglionar, sobre la liberación de androstenediona (A2) y Progesterona (P) en presencia de LH (50 ng/ml) en la cubeta ovárica, en el sistema integrado Ganglio Celíaco-Nervio Ovárico Superior-Ovario (GC-NOS-O) en Diestro1(D1) y Diestro2(D2). Se trabajó con ratas hembras Holtzman. Se incubó el sistema en buffer Krebs-Ringer a 37ºC en baño metabólico. Se extrajo líquido de incubación a los 30', 60', 120' y 180', y se dosó A2 y P por RIA. Resultados:A2 pg/mg y P ng/mg de tejido (medias±SEM), estadística: test de Student. La liberación basal de A2 en: D1 30': 5,4±0,1; 60':10,0±0,6; 120': 6,8±0,4 y 180':11,8 ±0,7.Con NA, Fent y Prop (A2) aumenta (p<0.001) en todos los tiempos, excepto con Prop. a los 180´.(P) basal a: 30´:0,124±0.004; 60': 0,152±0.008; 120': 0,192±0.006 y 180': 0,198±0.002. NA aumenta la liberación de P(p<0,001) y Prop disminuye (p<0.001) no existiendo diferencias con Fen. D2 A2 basal: a 30': 3,2±0,4; 60:15,6±0,008; 120': 32± 4 y 180': 9,6 ±0,3. En GC aumenta la liberación A2 excepto a los 60' (p<0.001), Prop y Fen. disminuyen respecto de sus controles. (p<0,001) a los 60´ y 120´. En cuanto a P basal: 30': 0,174±0.041; 60': 0,20±0,08; 120':0,20±0,06 y 180´:0,18±0.02, la presencia de agonista y antagonista disminuyen en los tiempos estudiados (p<0.001 vs basal).El efecto en la liberación de A2, en D2 se observa en el tiempo, mientras en D1 es el efecto neural con una pulsatilidad de los tonos. P muestra que los receptores son de tipo inhibitorios, lo que implicaría que NA en ganglio y vía neural libera alguna otra sustancia intermedia responsable del efecto inhibitorio tanto en D1 como en D2.
446. Noradrenalina modifica la liberación de óxido nítrico
desde el ovario en un sistema integrado. SM Delgado, Z Sosa de Gil, L
Aguado La presencia de la óxido nítrico sintetasa (NOS), ha sido detectada en cuerpo lúteo y células granulosas ováricas. El NO es un importante regulador de eventos fisiológicos en ovario, durante el desarrollo folicular y luteinización en células ováricas. El objetivo de este trabajo fue comprobar si la estimulación ganglionar con noradrenalina (NA), en un sistema integrado in vitro Ganglio celíaco (GC)- Nervio ovárico superior (NOS)-Ovario (O), modifica la síntesis de NO en ratas Hollman adultas hembras en Proestro (PE), Estro (E), Diestro I (DI) y Diestro II (DII). Se utilizó buffer Krebs-Ringer en baño metabólico. En la cubeta ganglionar se adicionó NA, en ácido ascórbico. Se extrajo líquido de incubación a los 30', 60',120' y 180’, se dosaron nitritos (método de Griess) en el medio de cultivo de la celda ovárica. Análisis estadístico: test de Student (medias ± SEM, en nmoles de nitritos/mg tejido). Los resultados obtenidos de NO muestran un incremento en PE y E en los valores basales respecto al D1 y D2 (p<0.001). La estimulación ganglionar con NA, aumenta la liberación de NO en PE y E (p<0.001 vs basales) significativamente, en todos los tiempos. En D1 aumenta solo a los 30' y 120' (p<0.001 vs basal) y en D2 disminuye (p<0.01 vs basal) a los 60' y 120'. La estimulación ganglionar produciría la liberación de algún neurotransmisor en el ovario que activaría la NOS o bien se libera NO desde las varicosidades nerviosas en el ovario.
447. Efecto de noradrenalina y neuropéptidos sobre la
secreción de progesterona en ovarios de rata in vitro en diestro I. M
Garraza, L Villegas, M De Bortoli, L Aguado La noradrenalina (NA) modifica la esteroidogénesis ovárica. La presencia de neuropéptidos y algunas de sus funciones han sido caracterizadas, por otros autores, en ovarios de ratas prepúberes. Se estudiaron los efectos de: neuropéptido Y (NPY), péptido intestinal vasoactivo (VIP) y Sustancia P (SP) (solos y con NA) sobre la liberación de progesterona (P) en ovarios in vitro en diestro I. Se trabajó con ratas adultas hembras vírgenes Holtzman de un peso medio: 275±25g. Se incubaron hemiovarios durante 180' en buffer Krebs-Ringer, a 37ºC en baño metabólico con el agregado previo de: ácido ascórbico (Asc) 1mM, NA 10-7 M, NPY, VIP, SP (50 ng/ml de c/péptido), y NA + los neuropéptidos. Resultados: (medias±SEM ng/ml) P basal Krebs: a 30'=0,36±0,03; a 60'=0,39 ±0,03; a 120'= 0,41±0,03; a 180'= 0,43±0,04. Con NPY, la P dismi-nuye a los 30’ (p<0.001 vs basal). Con VIP y con SP, la P dismi- nuye a los 30’, 60’y 120’ (p<0,05 vs basal). P basal Asc: a 30'= 0,35±0,05; a 60' = 0,36 ±0.04; a 120'=0,37±0,05; a 180'= 0.39 ± 0.02. Con NA, P disminuye a los 30’y 60’ (p<0.005 vs basal) La P disminuye en todos los tiempos con NA+NPY (p<0.025 vs NA), con NA+VIP y con NA+SP disminuye a los 30’,60’y120’ (p<0,001 vs NA) (p<0,005 vs NA). Conclusiones: en ratas adultas en DI se observa un patrón inverso con VIP y SP al observado en diestro II y diferente a lo visto en ratas prepúberes.
448. Efectos de activina, folistatina e inhibina sobre la
expresión de enzimas estrogénicas en células granulosas. Sergio
Ghersevich1, L Akinola2, R Vihko2, P Vihko2. Las enzimas (Ez) 17b-hidroxiesteroide dehidrogenasa (17HSD) tipo 1 y la citocromo P450 aromatasa (P450arom) catalizan la síntesis de estradiol en el ovario. Se examinaron los efectos de la activina (A), la folistatina (Fo) y la Inhibina (In) sobre la actividad (Act) y la expresión (Ex) de la 17HSD tipo 1 y la P450arom en cultivo de células granulosas (CG) inmaduras de rata. Las CG fueron incubadas 2 días con o sin A, In, Fo, y/o 8-Br-adenosina-3’, 5’-monofosfato cíclico (8-Br-cAMP). Dosis crecientes de A (1-100 ng/ml) aumentaron la Act y la Ex de la 17HSD tipo 1 en forma dosis-dependiente. El máximo aumento lo produjo 100ng/ml de A, incrementando la Act desde 7.7 ± 0.3 nmol/h/105 células (media±ES, controles) hasta 77.9 ± 11.5 nmol/h/105 células (tratadas, P<0.01) y 4.5 ± 0.5 veces la Ex de la Ez. La A (100ng/ml) aumentó significativamente el efecto de 8-Br-cAMP (1.5 mmol/l) sobre la Act y la Ex (3.2 ± 0.5 veces) de la 17HSD. Con Fo (100ng/ml ó 200 ng/ml), la A no afectó ni la Act ni la Ex de la 17HSD tipo 1. La Ex de la P450arom inducida por 8-Br-cAMP fue incrementada 3.4 ± 0.7 veces por A (100 ng/ml), excepto en presencia de Fo. La Ac y la Ex de las Ez no fueron afectadas por Fo ó In solas. Los resultados apoyan el rol de A como factor regulador de la síntesis de estrógenos en CG inmaduras y el papel de Fo como proteína moduladora de la A. El mecanismo de acción de A sobre Ex de la 17HSD tipo 1 utilizaría una vía complementaria a la vía de AMPc.
449. Inhibinas y FSH en el desarrollo temprano de un tumor
ovárico intraesplénico: P Hockl1, A Chamson-Reig1, E Sorianello1, S
Campo2, M Ballerini2, N Groome3, C Libertun1, V Lux-Lantos1 El injerto de un ovario en el bazo de una rata en estro ovariectomizada desarrolla un tumor lúteo (luteoma: L), gonadotrofinas-dependiente, en el que hay una disociación entre LH y FSH y en el que sugerimos un papel de las inhibinas (Life Sci 57:291:95). Aquí estudiamos el desarrollo de L y su relación con LH, FSH y las inhibinas A y B. El día del injerto se tomó sangre yugular y el ovario contralateral (Control: C). Las ratas se sacrificaron en las primeras 6 semanas (L1-L6) determinándose el peso tumoral y su contenido de inhibinas y los niveles séricos de LH, FSH e inhibinas A y B. El tamaño de los tumores aumentó con el tiempo. LH subió hasta la semana 5, luego cayó parcialmente (LH, ng/ml: C: 0.5±0.1; L1:6.6±1.7; L5: 26.3 ±6.2; L6: 10.4±2.2, p<0.05). FSH alcanzó el máximo en las semanas 1 y 2, luego descendió hasta valores basales en las semanas 3-5 y nuevamente se incrementó en la 6a (FSH, ng/ml: C: 2.5±0.2; L1: 18.4±2.5; L3: 4.6±0.6; L6: 9.37± 2.2, p<0.05). Las inhibinas A y B, en suero, siguieron un patrón similar aumentando marcadamente en las semanas 3-5 y cayendo en la 6a (Inhibina A, pg/ml: C: 302±22; L1: 375±180; L3: 975±108; L6: 533±179, p<0.05). Los niveles de las inhibinas séricas correlacionaron negativamente con los niveles de FSH de L1-L6 (Inhibina A: r: 0.94, p<0.01, Inhibina B: r: 0.95, p<0.01). En el tumor la inhibina A aumento la semana 3 en paralelo al suero. Concluimos que durante las primeras semanas, L secreta las inhibinas A y B y que éstas regularían la secreción de FSH. CONICET-UBA.
450. Inhibidor de la tiroperoxidasa en cultivos celulares en
monocapa. L Krawiec, L Bocanera, P Aphalo, G Juvenal, M Pisarev, M
Agote Resultados previos del laboratorio, demostraron la presencia, en el citosol de cultivos primarios de tiroides bovinas, de un inhibidor termoestable de la tiroperoxidasa (TPO). Los niveles de este factor aumentan en relación inversa a la disminución de la organificación del iodo en dichos cultivos. Se continuaron los estudios para caracterizar mejor este factor inhibitorio. Se trabajó con TPO extraida con tritón X-100 del precipitado de 105.000xg de tiroides bovinas frescas. La actividad de la enzima se midió por iodación de tirosina. El agregado a folículos libres (FL) de este factor, presente en el sobrenadante (SN) de 105.000xg, inhibe la organificación, explicando así, la ausencia de esta función en los cultivos celulares tiroideos (FL: 7500 ± 657 pmol/mg.prot/h., FL+SN: 305 ± 7,4 pmol/mg.prot/h, p<0.001). Asimismo, demostramos que este factor es dializable ,con peso molecular estimado cercano a 2 Kd. Su posible mecanismo de acción sería por interferencia en la incorporación del iodo a la tirosina, dado que la inhibición no se manifiesta en la reacción del guayacol. El inhibidor se encuentra presente en cultivos primarios de tiroides bovinas, porcinas y en la linea establecida de tiroides de rata: FRTL-5. En todos los casos mencionados el modelo de cultivo detemina su aparición, ya que se manifiesta en monocapas y no en folículos libres en suspensión (TPO 337±14 pmol I/mg prot/min., TPO+SN monocapa. 75±7, TPO+SN foliculos libres 318±33). De los resultados expuestos se puede concluir : 1) que el factor inhibitorio es una molécula de peso menor de 2Kd. 2) actúa interfiriendo con la unión del iodo a la tirosina. 3) el modelo de cultivo determina su presencia. 4) su aparición es independiente de la especie estudiada.
451. Rol de la vía de la Proteín Kinasa C en el transporte de
2-deoxiglucosa en la línea celular de tiroides de rata FRTL-5. D
Silberschmidt, M Agote, L Bocanera, L Krawiec, G Juvenal, MA Pisarev Es conocido que en FRTL-5, TSH e insulina estimulan el transporte de 2-deoxiglucosa (DOG) en forma aditiva a tiempos cortos. El objetivo de este trabajo fue determinar si la vía de la Proteina Kinasa C (PKC) esta involucrada. El transporte de DOG se determinó incubando los cultivos durante 30’ en presencia de 3H-2-DOG, expresándose los resultados como pmoles DOG/mg prot/30 min. Se incubaron células FRTL-5 con distintas concentraciones (10-10 a 10-7 M) de forbol miristato acetato (PMA) (estimulador de PKC) observándose un estimulo en el transporte de DOG. Cuando se estudiaron distintos tiempos de incubación (PMA 10-7 M), se observó un incremento sostenido hasta las 3 horas (Control: 527 ±169, PMA 3h: 2133 ±266 , p<0,01), en tanto que a las 72 horas el estímulo desaparece (PMA 72h: 686±14). Esta inhibición de la PKC por incubación durante 72 horas con PMA no tuvo efecto sobre el estímulo causado por TSH (TSH: 1170 ± 31, TSH + PMA 72h: 1305±218, ns). Por otra parte la staurosporina (inhibidor de la PKC) revierte totalmente el efecto de la insulina sola (Control: 474±7, insulina: 621±13 p<0,01, insulina + st: 510±34, ns) pero parcialmente el efecto conjunto de la insulina y TSH. Tal como ocurre con la insulina, el PMA tiene un efecto aditivo al estímulo de la TSH a los 180 minutos ( Control: 574±88, PMA: 3227±600, TSH: 2930 ±700, PMA+TSH: 6148 ± 1444 ). Estos datos sugieren que el estímulo del transporte de 2-DOG por insulina estaría mediado por la vía de la PKC no así el debido a TSH.
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