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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES EN POSTERS
NEUROENDOCRINOLOGIA 334. Inhibición de la descarga preovulatoria de LH por
antagonistas NMDA, en zona incerta medial (ZIm). C Bregonzio, A
Carrión, R Cabrera Los aminoácidos excitatorios son un componente esencial en la neurotransmisión que participa en la regulación de la secreción de LH y PRL desde la hipófisis anterior. El sistema dopaminérgico incerto-hipotalámico (ZIm) estimula la liberación preovulatoria de estas hormonas. El propósito del presente trabajo fue evaluar la posible participación del sistema glutamatérgico/NMDA en el control ejercido por el sistema dopaminérgico incerto-hipotalámico sobre la descarga de LH en diferentes condiciones hormonales. Se trabajó con ratas hembras en proestro (P) y ovariectomizadas (ovx) impregnadas con estrógeno (E) 25 µg 1 ó 2 dosis (E1 y E2 respectivamente) y progesterona (P)1 mg/rata (9 hs). Los animales fueron implantados bilateralmente en ZIm (- 1 semana) y el día del experimento se les colocó una cánula en la vena yugular; a las 15 hs se administró salina o AP-7 (100 nmoles, antagonista NMDA), o dopamina (DA) (2 µg) o AP-7 + DA. Se tomaron muestras de sangre cada hora durante 5 horas. El AP-7 inhibió la descarga de LH proestro 624±200 vs 5.5±2.5 p<0.001, ovxE1 1493±673 vs 131±52 p<0.05 y revertido por DA 1490±505. En ovxE2, AP-7 no tuvo efecto pero DA estimuló la liberación de LH 240±63 vs 132±32. Concluimos que en ZIm el sistema glutama-térgico/NMDA interactuaría con el dopaminérgico en el control de la descarga de LH.
335. Inhibición de la liberación de LH por allopregnanolona:
participación del sitio gabaa.. C Bregonzio, A Carrión, C Fader, R
Cabrera En el sistema nervioso central se sintetizan moléculas este-roidales, las cuales por su origen son llamadas “neuroesteroides”. Una de las más conocidas, moduladora del sistema gabaérgico es la allopregnanolona (ALL). El objetivo del presente trabajo fue evaluar la acción de este neuroesteroide sobre la descarga de LH en ratas hembra ovariectomizadas (ovx) tratadas con estrógeno (25 µg) s.c. y progesterona (1mg/rata) a las 9 hs. El día del experimento, se les colocó una cánula en la vena yugular para la extracción seriada de sangre. A las 15 hs se les administró ALL 50 y 100 nM. i.c.v o su vehículo. Se colectó sangre cada 1 hora desde las 16 hasta las 19 hs inclusive. En otro grupo de animales se administró el antagonista GABAA, Bicuculina (Bic) 25 ng/0.5 ml seguido de All 100 nM. Los resultados mostraron que ALL 100 nM produjo una caída en los niveles de LH 3.5±1.4 vs 1.2±0.3 18 hs y 4.1±1.3 vs 1.6±0.3 a las 19 hs (p<0.05, ANOVA 1 seguido de Student Newman Keuls), mientras que la dosis de 50 nM no tuvo efecto. Bic revirtió la inhibición inducida por ALL 3.04±0.5 vs 1.2±0.2 18 hs y 3.4±0.3 vs 1.5±0.3 a las 19 hs y per se no modificó los niveles de LH. Concluimos que los mecanismos regulatorios gabaérgicos, de la liberación de LH, podrían ser también modulados por los neuroesteroides, como la ALL.a nivel hipotalámico sobre el sitio GABAA
336. Participación del óxido nítrico (NO) en el efecto de
TNF-a sobre la liberación de prolactina. S Theas, A De Laurentiis, M
Pampillo, M Lasaga, B Duvilanski, A Seilicovich TNF-a es un mediador importante de la respuesta hormonal durante procesos infecciosos e inflamatorios. Dado que TNF-a y LPS aumentan la actividad de la NO sintasa (NOS) en diversos tipos celulares, estudiamos la participación del NO en el efecto inhibitorio de TNF-a y LPS sobre la liberación de prolactina desde células adenohipofisarias. TNF-a (50ng/ml) aumentó la actividad de NOS (determinada por conversión de L-arginina-14C a L-citrulina-14C) desde las 8h de incubación (C: 1178.17±57.57 dpm/well, TNF-a: 1360.20±53.69, p<0.05) y hasta las 48h (C: 1575.82±60.12, TNF-a:1993.98±63.02, p<0.01). LPS (0.1mg/ml) aumentó la actividad de NOS luego de 8 y 48h de incubación (C 48h: 1440.17±69.28, LPS 48h: 1912.67±79.37, p<0.01). La inhibición de NOS por NAME (1mM) revirtió el efecto inhibitorio de TNF-a sobre la liberación de prolactina (C: 906.2±61.56ng/well, TNFa:446.40±13.78, NAME:1145.32± 109.64, TNFa+NAME: 910.04±21.26, p<0.01). Nuestros resultados indican que TNF-a y LPS estimulan la actividad de NOS en adenohipófisis y que el NO mediaría el efecto inhibitorio de TNF-a sobre la secreción de prolactina.
337. Sistemas serotoninérgico, GABAérgico y aminoacidér-gico.
Su interrelación sobre la liberación de prolactina. S Carbone, B
Szwarcfarb, D Rondina, P Scacchi, O Ponzo, JA Moguilevsky Los sistemas serotoninérgico, GABAérgico y de aminoácidos excitatorios (EAA) estimulan la liberación de prolactina (PRL) en ratas hembra prepúberes. Se estudió su interrelación en el efecto facilitatorio sobre la secreción de la misma. Los experimentos (n=8-10) fueron hechos” in vivo”por inyección i.p. y la PRL plasmática (ng/ml) se midió por RIA. El antagonista GABAérgico bicuculina (BI) 1 mg/kg bloqueó el incremento de PRL (P<0.01) por NMDA 30 mg/kg y por kainato (KA) 2.5 mg/kg (C: 4.32±0.51; NMDA: 7.78±0.37; KA: 11±0.5; BI+NMDA: 4.28±0.62; BI+KA: 5±-0.38). El tratamiento con MK-801 (MK) 0.1 y 0.3 mg/kg y CNQX 2.5 y 5 mg/kg, antagonistas de receptores NMDA y no-NMDA de EAA respectivamente, disminuyó el nivel de PRL (P<0.01) inducida por 5-hydroxytryptofano (5-HTP) 75 mg/kg (C: 5±0.7; 5-HTP:114±8; MK+5-HTP: 47.6±7.1; CNQX+5-HTP: 40±6). El aumento de PRL producido por 5-HTP y los agonistas GABAérgicos muscimol y baclofen, no fue bloqueado por BI, MK y CNQX, respectivamente.El sistema GABAérgico mediaría la estimulación de PRL e interactuaría con otros neurotransmisores durante la maduración sexual.
338. Efecto de dihidrotestosterona (DHT) y un antagonista de
GnRH sobre las isoformas de FSH en la rata macho. Karina S Zitta,
Susana B Rulli, Stella Campo, RSCalandra Hemos descripto previamente que la distribucion de isoformas de FSH está modulada por andrógenos.En el presente trabajo se investigó si dicho efecto ocurre a través de la acción de GnRH. Se analizó un modelo in vivo con ratas adultas control (C), castradas (Cx), tratadas con DHT (Cx+DHT; 250 µg/rata) en combinación con el antagonista de GnRH Org 30276 (Cx+DHT+Ant; 1mg/kg/día), o con antagonista (Cx+Ant), durante 8 días.Se determinó el perfil sérico de FSH por RIA, donde se observó un aumento en los niveles de FSH (ng/ml) en Cx+Ant+DHT (10±1) respecto de Cx+Ant (4.8± 0.3; p<0.001), coincidente con C (9.6±1).A partir de citosoles de hipófisis se separaron tres grupos de isoformas por cromatografía en Concanavalina A: NR (estructuras de oligosacáridos triantenarias); DR (biantenarias); FR (alta manosa e híbridos). La proporción relativa de isoformas NR disminuyó en Cx (C:14±1; Cx:4±0.3; p<0.05) y se restableció en Cx+Ant, Cx+Ant+ DHT y Cx+DHT. En DR, Cx (33±2) no presentó diferencias significativas con Cx+Ant y Cx+Ant+DHT, pero sí con Cx+DHT (47±2), que es igual a C. FR aumentó en Cx (62±2) y Cx+Ant (51±4), respecto de C (38±3; p<0.05), y se restableció en Cx+Ant+ DHT (38±4) y Cx+DHT (38±2). En resumen, al bloquear la acción de GnRH, DHT es capaz de aumentar la secreción de FSH y modificar su perfil de isoformas.
339. Niveles Séricos de Prolactina Luego del Tratamiento
Prolongado con el Antagonista D2-5HTA2, Risperidona en Pacientes
Esquizofrénicos Hospitalizados. NM Zelaschi, S Gaitán, SO Panizzo,
AB Sobrero, AE López, JL Rodriguez, FM Archuby Los Antipsicóticos Típicos (APT) son antagonistas dopaminér-gicos D2 que aumentan los niveles de prolactina (PRL) durante el tratamiento prolongado o con dosis mínimas. El objetivo fue analizar el efecto hiperprolactinémico del nuevo antipsicótico antagonista D2-5 HTA2, Risperidona (Ris) en un grupo de 11 pacientes varones esquizofrénicos internados (Criterio DSM IV). La PRL se determinó por enzimoinmunoensayo en ayunas a las 8 AM, cada 6 semanas (Período I al VIII -8 determinaciones por paciente) y se comparó con voluntarios del mismo sexo (GC). La dosis permaneció constante durante el mes previo a cada dosaje y el período de seguimiento se extendió por 12 meses. Se utilizó el análisis no paramétrico de las varianzas para determinar las variaciones en las dosis y niveles de PRL durante sucesivas mediciones. (Test de ANOVA por Rangos de Kruskal - Wallis y el test de Mann Whitney. Los datos (x ± ds) mostraron un aumento significativo de la dosis (mg/día) a través de los períodos I-VIII: I = 2.18 ±0.4, VIII= 3.5 ±0.82 , H=31.55, p=0000. Los niveles de PRL del GC fueron 17.33 ± 4.44. Los niveles de PRL (ng/ml) aumentaron significativamente con relación al GC: período I 33.92 ± 19.16. p=.0042, H=19.12 p=.0142; II: 34.50 ± 2.36. p=.0001) VII 34.04 ±3.67, p=.00 76, VIII 32.07 ± 3.50, p=.042. Se sugiere que la Ris podría tener algunas de las propiedades farmacológicas de los antipsicóticos clásicos y que sus efectos neuroendócrinos podrían persistir durante tratamientos prolongados.
340. Interrelación de NO, GABA y Aminácidos excitatorios (AAE)
en la liberación de LH-RH en ratas hembra adultas. B Szwarcfarb, S
Carbone, D Rondina, V Rettori, O Ponzo, P Scacchi, JA Moguilevsky El NO, el GABA y los AAE modulan la liberación de LH-RH. Se estudió en fragmentos de hipotálamo medio basal (n=10)de ratas hembra adultas castradas y estrogenizadas la liberación in vitro de LH-RH (pg/ml) producida por : A) Nitroprusiato (NP) (5x10-4 M), liberador espontáneo de NO, en presencia de bicuculina (B) ( 1x10-4 M) y MK-801 (MK) (1x10-4 M), antagonista GABA-A y de receptores NMDA de AAE, respectivamente; B) N-methyl-L-arginina (NMMA) (5x10-4 M), inhibidor de la sintetasa del NO, en presencia de N-methyl-D-aspartato (NMDA) (5x10-4 M) y GABA (1x10-4 M). Se observó que la inhibición por NP (p<0.01) fue antagonizada por B y por MK (C: 1.72±0.25; NP: 0.6±0.04; B: 1.65±0.10; MK: 1.57±0.18; B+NP:3.6±0.85; MK+NP:1.6±021). El NMMA no antagonizó la acción inhibitoria del GABA ni el estímulo por NMDA (C:1.65+0.10; NMMA: 11.58±0.06; GABA: 0.45±0.07; NMDA: 3.7±0.6; NMMA+GABA: 064±0.17; NMMA+NMDA:4.36±0.32) (p<0.01). Se concluye que existiría una interrelación entre los sistemas estudiados, sobre la liberación de LH-RH.
341. Met-encefalina: regulación por glucocorticoides. Gloria
Levin, M de Lourdes Figuerola, M del Carmen Negueruela, Marta
Barontini Se ha descripto una acción estimulatoria de la producción de met-encefalina (ME) por acción de glucocorticoides in vitro. Con el objeto de estudiar el comportamiento de la ME plasmática in vivo analizamos pacientes con sindrome (SC, n=6) y enfermedad (EC, n=7) de Cushing, hiperplasia suprarrenal congénita (n=3) (HSC), Addison (n=3) (A) y respectivos controles (C), antes y después del test de supresión por Dx (SC, EC, HSC y C) y estimulación por ACTH (A y C). La ME se determinó por RIA con antisueros específicos. Los resultados se expresan en pmol/ml. La ME basal fue similar en controles y pacientes excepto en la HSC que tuvo valores no detectables. Post-Dx el incremento de ME fue significativo (p<0.01): C: 0.52±0.1, SC: 0.49±0.07, EC: 0.53±0.07. A los 30’ post-ACTH aumentó en C (0.58±0.19; p<0.05) y en dos A, disminuyendo a los 60’. Los pacientes con HSC post-Dx alcanzaron valores controles (0.28±0.01). En conclusión estos resultados muestran un incremento de los niveles de ME plasmática luego de la administración de corticoides o de la inducción de su aumento, dando nueva evidencia de la influencia de los glucocorticoides sobre los péptidos opioides endógenos.
342. Efecto endocrino de un agonista GABA C, el ácido
cis-4-aminocrotónico (CROT), en células adenohipofisarias. E
Rey-Roldán, V Lux-Lantos, A Champson-Reig, C Libertun Se describieron tres tipos de receptores gabaérgicos: A, B y C. Previamente hallamos efectos endocrinos para los A y B. Aquí investigamos las posibles acciones hormonales de los C. Estudiamos la acción del CROT sobre la secreción de PRL y LH en cultivos primarios de células adenohipofisarias de ratas hembras en tres modelos experimentales. Observamos: 1) Adultas en proestro: CROT 10-7 y 10-5M no modificó la secreción basal de PRL (3 hs.de incubación), pero disminuyó la liberación de PRL cuando se la estimula con TRH10-7 (en %): Control:100±6; TRH:232±24; TRH-CROT10-5:159±18 (ANOVA, p<0.05). 2) Cultivos enriquecidos en lactotropos (provenientes de ratas pretratadas con E2): CROT no modificó los niveles basales de PRL pero inhibió la liberación de PRL inducida por TRH10-8: C:100±10; TRH:162±13; TRH-CROT10-7:118±16 (p<0.05). 3) En células de ratas de 15 días, muy sensibles al GnRH, CROT (10-9, 10-7,10-5M) disminuyó la secreción de LH inducida por GnRH 10-9M: C:100±17, GnRH:346±35; GnRH-CROT10-9:278±32; GnRH-CROT10-7:255±45; GnRH-CROT10-5: 254±29 (p<0.05), sin modificar la secreción basal. Los resultados obtenidos muestran que el CROT, no modifica la secreción basal de PRL ni LH en células adenohipo-fisarias cultivadas “in vitro” en los tres modelos, pero el agonista GABA C inhibe la liberación de PRL inducida por TRH en ratas hembras en proestro o estrogenizadas y la secreción de LH aumentada por GnRH en animales de 15 días de edad. Por primera vez se describe un efecto endocrino de los receptores GABA C a nivel hipofisario. (CONICET-UBA)
343. Regulación por NGFb de la funcionalidad de
feocromoci-tomas humanos en cultivo. Eliana Pellizzari1, Inés
Armando1, María V. Cantó Soler2, Angela Suburo2, Selva Cigorra-ga1,
Marta Barontini1. Se evaluó “in vitro” la regulación por el factor de crecimiento neural (NGFb) sobre el potencial de diferenciación y la secreción de catecolaminas en las etapas iniciales de cultivos de feocromoci-tomas humanos. Las células disociadas de dos tumores (GM, intraadrenal y CQ, paraganglioma) se cultivaron en DMEM:F12, 10% SFB (basal), y a partir del día 2 bajo estímulo con NGFb (20ng/ml). Las catecolaminas secretadas, noradrenalina (NA) y adrenalina (A), se determinaron por HPLC-DE. En los cultivos se distinguieron numerosas células redondas no adherentes y células adheridas con y sin prolongaciones de tipo neurítico. Estos dos últimos fenotipos exhibieron inmunoreactividad para los marcadores neuronales: neuropéptido Y, somatostatina, encefalina, cromograninas y óxido nítrico sintasa neuronal. El NGFb indujo un mayor desarrollo de las prolongaciones neuríticas y cambios en los patrones de inmunomarcación neuronal. Simultáneamente disminuyó los niveles de catecolaminas en los medios de cultivo (NA: 33,7±6,8%; A: 43,0±9.6%, p<0,05, Wilcoxon rank sum test. Valores representativos (nmol/106cél) en medios condicionados entre los días 3 a 5 en cultivo, GM: basal: NA 44,6 - A 6,6; NGFb: NA 20,4 - A 3,7. CQ: basal: NA 8,4 - A 16,9; NGF: NA 6,9, A 12,6). Estos hallazgos demuestran que el NGFb regula las características morfológicas y funcionales de las células de feocromocitoma humano, y que el cultivo de estos tumores es un modelo útil para evaluar su regulación funcional.
344. La leptina aumenta la secreción de hCG en cultivos de
citotrofoblasto humano. D Chardonnens, Paula Cameo, FP Pralong, R
Gaillard, A Campana, P Bischof En el embarazo, la concentración sérica de leptina, se encuentra elevada. Recientemente se mostró que la placenta humana produce leptina, pero no se conoce el rol y su regulación. Usando cultivos puros de células de citotrofoblasto (CTB), medimos la producción de hCG basal, y después del agregado de GnRH, leptina recombinante humana (rhlep), y/o antagonistas de GnRH. Las CTB fueron obtenidas por tripsinización de placentas de primer trimestre, separadas de las células sanguíneas y del sincicio por gradiente de Percoll e inmunopurificadas con anticuerpos (anti CD45) acoplados a partículas magnéticas. Se incubaron por duplicado en presencia o ausencia de GnRH, rhlep (1-100 ng/ml) y/o los antagonistas. Se midió hCG por ELISA. Los resultados se expresaron como porcentaje del control por mg de proteína por día ± SEM. El análisis estadístico se realizó por anova. Rhlep estimuló la producción de hCG en forma dosis dependiente (p=0.0039). La incubación con 1µg/ml de rhlep, aumentó la secreción de hCG a 527 ±159% (p<0.006). Antagonistas de GnRH (0.1 µg/ml) inhibieron la estimulación producida por leptina (p=0.0028 y p=0.028). Esta es la primera evidencia de estimulación de la secreción de hCG por leptina en placenta. El GnRH estaría involucrado.
345. El epitelio de glándula mamaria normal murina sintetiza un
factor que inhibe la acumulación de triglicéridos en preadipocitos
3T3-L1. Marcela Sandoval, Cynthia Zizola, G Bertolesi, Carla Molinari,
María Eugenia Sanchez Ruiz, JC Calvo El sistema murino NmuMG/3T3-L1 (células epiteliales mamarias normales/fibroblastos preadipocitos) permite el estudio de la interacción epitelio mamario/estroma adiposo, utilizando cocultivos (SAIC/97) o medio condicionado obtenido de las líneas. Medio condicionado (MCD) de NmuMG, cultivadas en DMEM-7% SFB, liofilizado, fue adicionado a cultivos de 3T3-L1 en proceso de diferenciación. La acumulación de triglicéridos (TG) en los 3T3-L1 tratados con MCD, respecto de los tratados con iguales concentraciones de medio control (MCT: DMEM-7% SFB, sin contacto con NmuMG), resultó ser 97,3+16,7; 41,4+3,8; 30,5+5,4; 44,5+5,6 y 72,6+3,6 % para concentraciones de 50; 150; 300; 500 y 1000 mg/ml de MCD. Por el contrario, con concentraciones de 1500; 2000 y 2500 µg/ml de MCD, los valores de mg TG/µg ADN superaron a los obtenidos con MCT en un 10,4+2,0; 52,6+16,3 y 148,7+6,9 %. MCD, calentado a 56oC y 70oC durante 30 minutos, mantiene la capacidad inhibitoria , pero la pierde a 100oC. Los resultados indican que las NmuMG sintetizan un factor proteico que estaría implicado en el control de la acumulación de TG en los 3T3-L1 durante el proceso de diferenciación a adipocitos. Se ha iniciado la caracterización química del factor.
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